DB37_T 2269-2013大白菜霜霉病诊断及检测技术标准.pdf

ICS 65. 020B 16DB37山東东省地方标准DB37/T2269—2013大白菜霜霉病诊断及检测技术标准The standard for diagnosis and prediction of cabbage downy mildew2013-04-01发布2013-05-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省农业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：山东农业大学。本标准主要起草人：张修国、李壮、夏吉文。I DB37/T白菜霜霉病诊断及检测技术标准1范围本标准规定了大白菜霜毒病诊断及检测技术。本标准适用于大白菜霜毒病不同生育期症状描述与病害诊断，室内活菌繁殖技术，病菌形态学描述致病性测定技术，病害发生气候条件，病菌分子检测技术。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1大白菜霜莓病cabbagedownymildew由卵菌门霜霉属寄生霜霉菌（Peronosporaparasitica(Pers.）Fr.）引起的一种气传病害，属专性寄生性卵菌病害，该病害是我省大白菜最重要的叶部病害之一，不同生有期均严重发生，流行重病年份常造成大白菜减产，易导致白菜产量降低及品质下降。2. 2病状symptom of a disease大白菜病部出现的异常特性，如叶片呈现淡黄色或黄绿色病斑，后呈黄褐色，多角形或不规则形病斑。2. 3病征symptom of a disease大白菜病部出现病原菌子实体，如叶背病部产生白色至灰白色霜状霉层等。2. 4接种体inoculum用于接种引起大白菜霜毒病发生的病原物或病原物的一部分。2. 5人工接种artificial inoculation在适宜条件下，人工操作技术将大白菜霜霉病菌接种于大白菜适宜部位并使之发病的过程。2. 61 DB37/T 2269—2013致病性pathogenicity病原物所具有的破坏寄主和引起植物发生病变的能力。2. 7病情指数diseaseindex(D)病情指数（缩写为D1）又叫发病指数、感染指数，与发病率一样是表示发病程度的一种方法。发病率是指一个群体中发病的多少，用百分率表示，病情指数（DI）是根据一定数目的植株或植株器官）（）平均发病程度的数值。3仪器及试剂带光源的扩大镜、双目解镜（10x～50x)、显微镜(100x~1000x)、离心机(1000r/min~4000r/min)、不锈钢筛(孔径60μm)、振荡器(200r/min)、0.02mo1/L磷酸缓冲液(pH=7)、苯胺蓝、乳酚油、乳酚油配制：苯酚结晶（水浴加热溶化)20mL、乳酸20mL、甘油40L，蒸馏水20mL混合而成、10%氢氧化钾溶液配制：取氢氧化钾10g，加水90mL溶解配成10%氢氧化钾溶液。4大白菜霜霉病病状与病征鉴定见附录A。5大白菜霜毒病原诊断5.1大白菜霜毒病原鉴定见附录A。5.2病叶检查在光线充足处，逐片检查大白菜叶片有无霜霉病可疑症状，叶背有无灰褐色的霜霉层。5.3病原菌检验5.3.1直接镜检用解剖针挑取病斑上霉状物制片镜检，用显微镜观察有无病原菌的孢囊梗和孢子囊，记录其形态特征，必要时测量孢囊梗长度和孢子囊大小（见附录A）。5.3.2洗涤检验将未发现霜霉层的可疑大白菜病斑及碎片，置250m1三角瓶内，加适量蒸馏水浸软，振荡器激烈震荡5min，洗下病斑表面病原物，将洗涤液倒进离心管，以1000r/min离心5min，去上层清液，取沉淀液置载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜检查有无大白菜霜霉病菌的孢囊梗和孢子囊，每批样品至少检查15个玻片。5.3.3叶组织透明法检验卵抱子2 DB37/T 2269—2013选取病叶上霉状物稀少的老病斑置于小烧杯中，加适量10%的氢氧化钾溶液，煮沸5min～10min至叶组织透明，加0.05%苯胺蓝（棉蓝）乳酚油作浮载剂，置显微镜下逐片观察有无卵抱子。5.3.4冰冻匀浆法检验卵抱子见附录A.6大白菜霜霉病菌致病性测定6.1标本采集采集具典型症状的大白菜霜毒病病害标本，尽可能采集到不同大白菜品种、不同地理区域、不同发病时期及不同发病部位的大白菜霜毒病标本。6.2标本保存用专柜保存标本，按类排列，标本柜应放置于干燥透气良好的环境，内置樟脑球，注意检查，避免标本发霉、虫蛀。6.3病菌纯化将采集的大白菜霜霉病标本于体视镜下利用挑针挑取单个孢子囊接种于健康大白菜叶片，适宜温、湿条件诱导发病，23周产生明显病斑及大量病菌后，制片制片、镜检和显微照相描述孢囊梗、孢子囊形态特征，借助文献资料鉴定该病菌（病菌形态学特征见附永A）：6.4致病性测定6.4.1接种体制备采集典型大白菜霜霉病叶，毛笔沾取叶面病菌于盛有无菌水的烧杯中，再滴加1