DB37_T 3232-2018中兽药散剂中4种喹诺酮类药物的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

ICS11.220B41DB37山長东省地方标准DB37/T3232—2018中兽药散剂中4种喹诺酮类药物的测定液相色谱-串联质谱法Determination of four quinolones in chinese veterinary medicine powder by liquidchromatography tandem mass spectrometry201805-17发布2018-06-17实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 3232—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：青岛农业大学、中国农业大学，本标准主要起草人：郝智慧、魏秀丽、邱梅、唐启和、崔冰、孙京新、徐坤、玉清、张瑞丽、黄亭亭、王苹苹。I DB37/T 3232—2018中兽药散剂中4种喹诺酮类药物的测定液相色谱一串联质谱法1范围本标准规定了中善药散剂中唑诺酮类药物含量测定的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）。本标准适用于止剩散、四黄止剩赖粒、白头翁散、在术香连散、扶正解毒散和黄连解毒散中盐酸落美沙、甲颈酸培氟沙星、盐酸左氧氟沙星、烟酸诺氟沙星含量的测定，本标准检测限为0.06μg/kg，定量限为0.2μg/kg-2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件，GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理用甲酸乙睛溶液提取中草药散剂中的唑诺酮类药物，蒸干、复溶、过滤，用液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。t试剂或材料除非另有规定，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中一级水的规定。4.1甲酸：高效液相色谱纯。4.2乙睛：色谱纯。4.30.2%甲酸水溶液：移取甲酸（4.1）2mL，加水定容至1000mL，混匀。4.40.2%甲酸乙睛溶液：移取0.2ml甲酸（4.1），以乙睛（4.2）定容至100mL，混匀。4.50.2%甲酸-乙晴落液：量取10ml0.2%甲酸水溶液（4.3）于90ml乙晴（4.2）中，混匀4.6盐酸洛美沙星对照品。4.7甲磺酸培氟沙星对照品。4.8盐酸左氧氟沙星对照品。4.9烟酸诺氟沙星对照品。4.10标准储备液（100.0g/L）：分别精密称取盐酸洛美沙星（4.6）、甲磺酸达氟沙星（4.7）、盐酸左氧氟沙星（4.8）、烟酸诺氟氯沙星对照品（4.9）各约1.0mg（精确到0.01mg），用乙溶解并稀释成浓度为100.0mg/L的标准储备液。2℃～8℃，有效期为3个月，4.11混合标准液（1.0mg/L）：分别准确量取4种喹诺酮类药物单个标准储备液（4.10）各1mL置于100mL容量瓶中，用乙睛稀释定容至100mL。现配现用。4. 122有机微孔滤膜：0.22增1 DB37/T 3232—20185仪器设备5.1分析天平：感量 0.00001 g5. 2天平：感量0.01g5. 3振荡器。5. 4离心机： 4000 r/min。5. 5旋转蒸发仪。5. 6液相色谱-质谱联用仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。6试验步骤6. 1样品前处理6. 1. 1称取试样5g（精确到0.01g）于50ml离心管中，加入0.2%甲酸乙腈溶液（4.4）10ml，充分振荡提取10min，4000r/min离心5min，转移上清液至50ml的梨形瓶中。6. 1. 2残余物按上述方法重新提取1次，合并2次上清液，混匀。6. 1. 3上清液经50℃旋转蒸发至近干，准确加入1mL0.2%甲酸-乙腈溶液（4.5）溶解残渣，混匀，过0.22有机微孔滤膜（4.12），待测。6.2标准曲线的制备6, 2. 1准确量取1.0g/L混合标准储备液（4.11），用0.2%甲酸-乙睛溶液（4.5）进行系列稀释，配制成浓度分别为1.0 ng/ml、5.0ng/ml、10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0ng/mL、100.0 ng/mlL的混合标准工作液，过0.22有机微孔滤膜（4.12），测定。6. 2. 2以混合标准工作液浓度为横坐标，特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。6. 3测定6. 3.1液相色谱参考条件a) 色谱柱：C柱，100mX×2.1m（粒径1.7μm或相当者）;b)流动相：A相为0.2%甲酸溶液（4.3），B相为乙睛（4.2），梯度洗脱，条件见表1：c) 柱温：35℃：d) 流速: 0. 4 mL/min:e) 进样量：10μL.表1梯度洗脱程序序号时间(min)A (%)B (%)0. 0901024. 080205. 020806. 08020