DB37_T 2140-2012预混合饲料中维生素B1、B2、B6和烟酰胺的同步测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65. 120B 46DB37山 長东省地方标准DB37/混合饲料中维生素B1、B2、B.和烟酰胺的同步测定高效液相色谱法Determination of vitamin B1、B2、B6 and niacinamide in feedHigh performance liquid chromatography2012-05-14发布2012-07-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 2140—2012前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会提出并归口，本标准起草单位：山东省饲料质量检验所。本标准主要起草人：强莉、李桂华、刘雪芹、李俊玲、战余铭、张玮、王现杰。I DB37/T 2140—2012预混合饲料中维生素B1、B2、B.和烟酰胺的同步测定高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱仪同步测定预混合饲料中维生素B1、维生素B2.维生素B和烟酰胺的方法。本标准适用于维生素预混合饲科和复合预混合饲科中维生素B、维生素B.维生素B，和烟酰胺的测定.本方法最低定量限维生素B：、维生素Bs、烟酰胺为40mg/kg，维生素B:为10mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 20195动物饲料试样的制备3原理试料中的维生素B1、维生素B2、维生素B。和烟酰胺用盐酸溶液提取、过膜后，在高效液相色谱反相柱上分离，紫外检测器280nm处测定，外标法定量。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水符合GB/T6682一级水的规定，试剂包括：乙睛：色谱纯：b)三氟乙酸：色谱纯：c)冰乙酸：优级纯：d)盐酸：e)氢氧化钠：f)盐酸溶液：c(HC1)=0.5mo1/L。量取45mL的盐酸注入1000 mL的水中;g)盐酸溶液：c(HC1)=0.1mo1/L。量取9 mL的盐酸注入1000 nmlL.的水中：h)氢氧化钠落液：c(Na0H)=2mo1/L。称取8g氢氧化钠，落于100mL水中i)0.1%三氟乙酸溶液：准确吸取三氟乙酸1.00mL于1000mL容量瓶，用水定容，播匀：j)流动相：乙睛和0.1%三氟乙酸溶液：k)维生素B1、维生素B2.维生素B,和烟酰胺标准品：纯度大于98%；1)标准贮备溶液，操作步骤如下： DB37/T 2140—20121）维生素B标准忙备落液：准确称取维生素B1标准品0.0200g于100mL棕色容量瓶中，加0.1mo1/L盐酸溶液溶解，超声15min，待全部溶解后，用0.1mol/L盐酸溶液定容至刻度，此溶液浓度为200μg/mL。避光操作。置2℃～8℃C冰箱保存，保质期3个月：2)维生素Bz标准贮备溶液：准确称取维生素B2标准品0.0200g于100mL棕色容量瓶中，加5mL2o1/L氢氧化钠落液落解，超声使其全部落解后，加约60mL水，再加2.5ml冰乙酸，用水定容至刻度，此落液浓度为200μg/mL，置2C8冰箱保存，保质期3个月：3)维生素B。标准贮备溶液：准确称取维生素B6标准品0.0200g于100mL棕色容量瓶中，加水溶解，超声15min，待全部溶解后，用水定容至刻度，此溶液浓度为200μg/mL,置2℃~8℃冰箱保存，保质期3个月；4)烟酰胺标准贮备落液：准确称取烟酰胺标准品0.0200g于100m棕色容量瓶，用水落解、定容至刻度，此溶液浓度为200μg/mL，置2℃～8℃冰箱保存，保质期3个月。m)混合标准工作溶液，操作步骤如下：1)分别准确移取维生素B1、维生素B2、维生素B、烟酰胺的标准贮备溶液10.00mL于同一100mL棕色容量瓶中，用0.1%三氟乙酸溶液定容。该溶液浓度为20μg/mL，现用现配：准确移取上述混合标准落液2.5mL、5mL、10mL、25mL、50mL于100mL标色容量瓶中，用0.1%三氟乙酸溶液稀释至100mL。该标准系列中维生素B1、维生素B2、维生素Bc、烟酰胺的相应浓度分别为:0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL,5.00μg/mL、10.00μg/mL,现用现配。5仅器和设备仪器和设备主要包括：高效液相色谱仪：配有紫外检测器：b)分析天平：感量0.1mg:c)超声波清洗器：可加热至80：d)离心机：转速大于4000r/nin：e)针头过滤器：备0.45μm（或0.2μ）滤膜。6试样的制备选取有代表性饲料样品至少500g：按GB/T20195制备样品，全部通过孔径为0.45mm的试验筛混匀。装入密闭容器中保存。7分析步骤7.1提