色谱分离技术课件.pptxVIP

 色谱分离技术; 第一节 色谱分离技术概要;;一、色谱技术的基本概念;;;;;;;;;;;;;;;二、色谱法的分类;;;;;;三、色谱系统的操作方法;;;;;;;;;;第二节 吸附色谱法;;;;;;（三）薄层色谱操作;;（三）薄层色谱操作;;;三、吸附柱色谱法; ;;;;第三节 分配色谱法;;;;三、分配色谱基本操作;;第四节 离子交换色谱法;;二、离子交换剂的类型与结构;;;;三、离子交换剂的理化性能;;;;四、离子交换色谱基本操作;;;;;;;;;第五节 亲和色谱;;;三、亲和色谱介质;;;;;;（二）载体;;;;;;;2、偶联反应; （2） 环氧基活化法 可用于固定分子结构为R-NH2、R-OH和R-SH的配基。常用的活化试剂为1,4-丁二醇-二缩水甘油醚（BGE）和环氧氯丙烷。 以活化羟基为例： 或引入活性基团环氧基后，可采用直接法或间接法（氧化法、碳二亚胺法、戊二醛法）固定配基。 ; （3）硅胶的活化 活化硅胶常采用硅烷化试剂，如γ-氨丙基三甲（乙）氧硅烷和环氧丙基三甲基硅烷等，反应为： 引入活性氨基或环氧基后，在酸性溶液中环氧基可发生二醇化反应： ;;;;;1.配基固定化。将与纯化对象有专一结合作用的物质，连接在水不溶性载体上，制成亲和吸附剂后装柱（称亲和柱）。;;;;;;;;;;第六节、凝胶层析;;（一）原理;;;;;;;;;;（二）、层析用凝胶;3、聚丙烯酰胺凝胶(Polyacrylamide gel商品名为Bio-Gelp); （三）凝胶柱的制备及其操作技术 1、凝胶的选择;;2、凝胶粒度的选择;;;3、凝胶的预处理;;4、层析柱的选择;5、凝胶柱的装填;;;;;;6、柱的检查;7、操作;;;;（2）洗脱与收集;;（3）凝胶柱的再生;;;（四）影响凝胶层析的因素 1、凝胶的选择 2、凝胶粒度对分离效果的影响 3、洗脱液流速对分离效果的影响 4、离子强度和pH值 5、样品液体体积对分离效果的影响 6、凝胶柱的长度、直径和分离效果的关系;（五）防止微生物污染凝胶的方法 选择凝胶防腐剂必须具备的条件： 1、防腐剂不与凝胶发生作用 2、所用防腐剂的浓度不会引起溶质的变化、沉淀和丧失生物活力 3、防腐剂不会使凝胶色泽变化 4、防腐剂在紫外光部分尽可能没有吸收等 常用防腐剂：叠氮钠、可乐酮等。;（六）应用 1、去盐； 2、溶液的浓缩； 3、测定高分子物质的分子量； 4、分离提纯酶、蛋白质、氨基酸、核苷酸激素、抗生素等生物制品； 5、去除热源物质； 6、应用于分析。