DB37T 665-2007饲料中苏丹红的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS65.120B20DB37山东省地方标准DB37/T 665—2007饲料中苏丹红的测定高效液相色谱法Determination of Sudan in feeds by HPLC2007-03-09发布2007-05-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 665—2007前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由山东省畜牧办公室提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省饲料监察所。本标准主要起草人：李俊玲、李桂华、李会荣、朱良智、战余铭、杨志强。- DB37/T 665—2007饲料中苏丹红的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了高效液相色谱测定饲料中苏丹红的方法，本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中苏丹红的测定。本标准最低定量限苏丹红I、苏丹红III为1mg/kg，苏丹红II、苏丹红IV为0.5mg/kg2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试料中苏丹红用乙睛提取、过膜后，在高效液相色谱反相柱上分离，紫外检测器310nm处测定，用二极管阵列检测器确证。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水符合GB/T6682一级水的规定。4.1乙晴.4.2乙睛，色谱纯。过0.45μⅡ有机滤膜。4.3三氯甲烷，色谱纯。4.4HPLC流动相：乙睛（4.2）十水=950十50，混匀。用前超声脱气5min～10min。4.5苏丹红标准贮备液准确称取苏丹红I对照品（含量为96.7%）0.013g、苏丹红Ⅱ对照品（含量为83.3%）0.015g、苏丹红IⅢI对照品（含量为91.3%）0.014g、苏丹红IV对照品（含量为75.5%）0.016g，分别于25ml容量瓶中，苏丹红I、苏丹红Ⅱ用乙晴(4.2)落解并定容，苏丹红ⅡⅢ、苏丹红NV均先用少量三氯甲烷(4.3)落解，再用乙睛定容，其浓度分别为500μg/mL。i避光操作。4.6苏丹红标准工作液分别准确移取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、支苏丹红IⅢI、苏丹红IV的标准贮备液（4.5)5.00mlL于同一50mL容量瓶中，用乙睛定容。该溶液浓度为50g/mL，现用现配。5仪器5.1分析天平：感量0.1mg5.2超声波清洗器。5.3振荡器，5.4离心机：5000r/min.5.5旋涡混合器。5.6高效液相色谱仪：具有C柱、紫外检测器和二极管阵列检测器。 DB37/T 666—20076试样的制备按GB/T20195规定执行。7分析步薪7. 1提取称取适量试料(配合饲料、浓缩饲料5g，添加剂预混合饲料2g)精确至0.1mg，置于50mL.离心管中，准确加入乙睛（4.1）25ml，振摇使试料全部润湿，于旋涡混合器（5.5）上混合1min后，放在振荡器（5.3）上振荡提取60min振荡结束后，再于旋涡混合器（5.5）上混合1min，于离心机（5.4)上5000r/min离心5min。取上清液适量过0.45μm有机滤膜，待测。对于含苏丹红较高的浓缩饲料和添加剂预混合饲料，可先取适量上清液，用乙睛（4.2）稀释，使试样溶液中苏丹红最终浓度为0.2μg/mL~10μg/mL。7.2标准系列准确移取标准工作液(4.6)0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00 ml、5.00mL、10.00ml，用乙睛（4.2)稀释至50mL.该标准系列中苏丹红I、苏丹红II、苏丹红IⅢI、苏丹红IV的相应浓度分别为：0.20μg/ml、0.50 μ g/mL、1. 00 μg/mL、2. 00 μg/mL、5. 00μg/mL、10. 00 μg/mL现用现配。7.3色谱参考条件色谱柱：Cs柱，25cmX4.6mm,id，5μm柱温：室温。流动相：乙睛+水=950+50流速：1.OnL/min检测器：紫外检测器，二极管阵列检测器。检测波长：310nm扫描范围：200nm~600nml.进样量：20μL.7.4测定7.4.1标准曲线的绘制将上述标准系列（7.2）从低浓度到高浓度分别注入高效液相色谱仪，以苏丹红的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别绘制苏丹红I、苏丹红IⅡI、苏丹红Ⅲ和苏丹红IV的工作曲线，并计算回归方程。7.4.2试样测定将待测液注入高效液相色谱仪，据保留时间定性，以峰面积定量。7.4.3 确证除用保留时间定性外，还应用二极管阵列检测器测定苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红IⅢ和苏丹红IV在200nm-600nm区间的特征光谱，苏丹红I在