DB37_T 2272-2013黄瓜灰霉病诊断及检测技术标准.pdf

ICS 65. 020B 16DB37山 長东省地方标准DB37/瓜灰霉病诊断及检测技术标准The standard for diagnosis and prediction of cucumber grey mould2013-04-01发施山东省质量技术监督局山东省发布 DB37/T言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由山东省农业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：山东农业大学。本标准主要起草人：张修国、李壮。I DB37/T 2272—2012黄瓜灰霉病诊断及检测技术标准1范围本标准规定了黄瓜灰霉病诊断及检测技术。本标准适用于黄瓜灰毒病不同生育期症状描述与病害诊断，病菌分离培养及保存技术，病菌形态学描述，致病性测定技术，病害发生气候条件，病菌分子检测技术。22术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1黄瓜灰霉病Cucumber grey mould由子囊菌门、柔膜菌目、核盘菌属、富克尔核盘菌（Sclerotiniafuckeliana（deBary）Fuckel）、无性型属半知菌亚门、灰葡萄孢（BotrytiscinereaPers.exFr.）所引起的叶部病害，该病害主要危害幼瓜及叶、茎，病部初呈水渍状褪色病斑，逐渐变软、腐烂，产生褐色霉层，后变为灰褐色霉状物.2. 2病状symptom of adisease黄瓜病部所显示的异常特性，如叶片褪色、病班、变软及腐烂等。2. 3病征symptom of a disease黄瓜病部病部出现病原菌子实体，如灰霉病菌丝体、褐色霉层、褐色霉状物等，2. 4接种体inoculum用于接种引起黄瓜灰毒病发生的病原物或病原物的一部分。2. 5接种悬浮液inoculum suspension用于黄瓜灰毒病接种含有定量接种体的液体，2. 6人工接种artificial inoculation在适宜条件下，通过人工操作将黄瓜灰毒病菌接种于黄瓜适当部位并使之发病的过程，1 DB37/T 227220122. 7致病性pathogenicity病原物所具有的破坏寄主和引起植物发生病变的能力。2. 8病情指数diseaseindex（DI）病情指数（缩写为D1）又叫发病指数、感染指数，与发病率一样是表示发病程度的一种方法。发病率是指一个群体中发病的多少，用百分率表示，病情指数(DI）是根据一定数目的植株或植株器官各病级（把植株或植株某一器官感染病害轻重程度划分为等级称为病级）核计其发病株（器官)数所得平均发病程度的数值。3仪器及试剂带光源扩大镜、双目解镜(10x～50x)、显微镜(100x~1000x)、乳酚油、乳酚油配制：苯盼结晶（水浴加热落化）20mL、乳酸20mL、甘油40mL，蒸馏水20mL混合而成，t黄瓜灰霉病病状与病征见附录A。5黄瓜灰霉病病原诊断5.1黄瓜灰莓病菌特征见附录A。6黄瓜灰霉病菌鉴定与致病性测定6.1菌株分离鉴定28℃下培养2周后，制片镜检和显微照相描述分生孢子梗和分生孢子特征，借助文献资科鉴定该病菌。菌株在PDA平板培养上充分培养后，移置于盛有无菌水的5mL冷凝管中4下保存。6.2病叶检查检查黄瓜叶片有无灰毒病可疑症状，叶片有无灰福色毒层，6.3病原菌检验6.3.1直接镜检用挑针挑取病斑上毒状物制片镜检，显微镜观紧有无病菌分生孢子梗和分生孢子，描述、记永分生孢子梗和分生孢子形态特征，必要时测量分生孢子梗和分生孢子的大小（见附录A）：6.3.2洗涤检验将未发现灰毒病层的可疑黄瓜病斑及碎片，置250mL三角瓶内，加适量蒸馏水漫软，振荡器激烈震荡5min，洗下病斑表面病原物，将洗涤液倒进离心管，以1000r/min离心5min，去上层清液，取沉2 DB37/T 2272—2012淀液置数玻片上，盖上盖玻片，用显微镜检查有无黄瓜灰毒病菌的分生孢子梗和分生孢子，每批样品至少检查15个玻片。6.4致病性测定6.4.1接种体制备分离纯化获得的单孢菌株于PDA或PCA平板培养基上充分培养（见附录B)，制备菌丝块，并取大量培养物加适量无菌水制备分生孢子愁浮液，另加适量无菌水稀释至适宜孢子浓度，利用血球记述板检测分生孢子浓度，调至分生孢子浓度为1X×10°个/ml，接种备用。6.4.2接种期和接种浓度黄瓜灰霉病适宜接种期为12叶期，接种浓度约为5×10°个孢子/mL。6.4.3接种方法6. 4.3.1黄瓜叶片贴滤纸片法用直径为5mm滤纸片葩取5×10°个孢子/mL分生孢子悬浮液置于黄瓜子叶正面中部。6.4.3.2黄瓜叶片点接法用移液枪点接5×10°个孢子/mL分生孢子悬浮液于黄瓜子叶叶片正面中部，每子叶1滴，10mL/滴，6.4.3.3黄瓜叶片喷雾法用喉头喷雾器将5×10个孢子/mL的分生孢