DB37T 1423-2009饲料中色氨酸的测定.pdf

ICS 65. 120B 46备案号：DB37山东省地方标准DB37/T1423—2009饲料中色氨酸的测定Determination of tryptophan in feedstuffs2009-12-14发布2010-01-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 1423—2009前言本标准由山东农业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心（济南）。本标准主要起草人：张红、王文正、黎秀卿、张海松、王峰恩、秦宏伟、姜国华。 DB37/T1423—2009饲料中色氨酸的测定1范围本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定饲料中色氨酸的方法。本标准适用于配合饲料、预混料、浓缩饲料和单一饲料中色氨酸含量的测定。本方法最低检出限为10pmo1。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的弓用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验氢用水规格和试验方法3原理饲料中的蛋白质经碱水解后，降解成多肽和游离的色氨酸，经氨基酸自动分析仪分析测定色氨酸含量。4试剂与材料4.1除另有说明，仅使用分析纯试剂：水为GB/T6682规定的二级水。4.2水解液：将20g氢氧化钠用5%SnCls溶解并定容至100L，临用前配置。4.3柠檬酸钠缓冲液，pH22：称取柠橡酸三钠19.6g，用水溶解后加入优级纯盐酸16，5L，硫二甘醇5.0L，苯酚1g，加水定容至1000mL，播匀，用G4垂熔玻璃砂芯漏斗过滤，备用。4.46mo1/L的盐酸溶液：将优级纯盐酸与水等体积混合。4.5高纯氮气：纯度99.99%4.6L-色氨酸，色谱纯。4.6.1标准溶液配制L-色氨酸标准游液：准确称取L-色氨酸20.4加g用2mL2%的氢氧化钠溶液溶解，再用水定容至100L，则冷暗处备用，该溶液浓度为2umol/L；临用时用pH2.2缓冲液（4.3）稀释20倍后作标准液，浓度为 0. 1umol/L.5仪器5.1分析天平：精确至0.0001ga5.2恒温干燥箱。5.3水解管：耐压硬质玻璃管，体积20-30L，用去离子水冲洗干净并烘干。5.4酒精喷灯。5.5氨基酸自动分析仪：节三酮柱后衍生离子交换色谱仪，分辨率大于90%。6试样制备取有代表性的试样，按四分法缩减至g左右，粉碎并过02孔径筛，充分混匀后装入密闭容器中备用。7测定步骤1 DB37/T 1423—20097.1样品前处理准确称取蛋白含量在7.5-30mg的试样（约50-100ng，精确到0.0001g）于水解管中，加入5L水解液（4.2)，通高纯氮气搅动，以排除空气，再加5L水解液冲下管壁上附着的样品。水解管马上用喷灯封口、置入110C烘箱中水解22小时。将水解液倒于置入冰水浴的烧杯中，加盐酸溶液（4.4）中和，使为6-7，然后转移到50=L容量瓶定容至刻度。摇匀后过滤于样品瓶中，待测。7.2测定按仪器说明书，调整好仪器操作参数、洗脱用缓冲液的叫和适当的分析程序，分别注入0.1uml/色氨酸标准工作液和制备好的试样水解液，用氨基酸自动分析仪以外标法分析测定试样中色氨酸含量。8计算样品中色氨酸计，单位为克每百克（g/100g）表示，按公式（1）计算：W =C×1/50×F×V×Mmx10°X100.................(1)式中:一样品中色氨酸的含量，单位为克每百克，g/100g：试样测定波中色氨酸含量，单位为微摩尔每毫升，umol/nL：试样稀释倍数水解后试样的定容体积，单位为毫升，ml；色氨酸的分子量，为204.1;—试群的质量，单位为克，g：1/50——折算成每毫升试样测定的氮基酸含量，单位为微摩尔每升，umol/L；10—将试样含量由纳克折算成克的系数。计算结果以算术平均值表示，结果精确至小数点后两位数字。8.1精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的12%。色谱图见图1。图1色氨酸标准溶液谱图2