DB37_T 2385-2013猪流感诊断技术.pdf

ICS 65. 020. 30B 41DB37山東东省地方标准DB37/T2385—2013猪流感诊断技术Diagnosis technology of Swine Influenza2013-09-22发布2013-10-30实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 2385—2013前言本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由山东省动物疫病预防与控制中心负责起草，中国农业大学、中国科学院微生物研究所参加起草。本标准主要起草人：刘金华、陈静、毕玉海、田夫林、张进林、王贵升、马慧玲、孙圣福、孔祥华、于青海、王士荣、李云岗、兰邹然、李玉杰、葡晓月、徐鸿、徐聪。I DB37/T 2385—2013附录B（资料性附录）0.01MK104溶液的配制230mgKI04溶于PBS中，至终体积100mL，过滤除菌注：KI04溶液需新鲜配制，在1周内使用。9 DB37/T 2385—2013附录C（资料性附录）1%丙三醇溶液的配制1.0mL丙三醇加入99mLPBS中，过滤除菌。10 DB37/T 2385—2013猪流感诊断技术1范围本标准规定了猪流感病毒分离与鉴定技术、血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验、酶联免疫吸附试验等的技术要求本标准所规定的猪流感病毒分离与鉴定技术适用于H1亚型猪流感病毒、H3亚型猪流感病毒的病原分离和鉴定：血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验适用于猪流感病毒的血凝素亚型鉴定：酶联免疫吸附试验适用于H1亚型猪流感病毒、H3亚型猪流感病毒亚型特异性检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18635—2002动物防疫基本术语GB/T 189362003高致病性禽流感诊断技术GB19442一2004高致病性离流感防治技术规范《人感染猪流感预防控制技术指南》（2009版试行）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件，3. 1鼻拭子nose swab用采样棉签，采集人或动物鼻腔内液体作为检测用的样品。3. 2喉拭子throat swab用采样棉签，采集人或动物喉头内液体作为检测用的样品，3. 3红细胞凝集试验Hemagglutinationassay，HA利用流感病毒血凝素蛋白（HA）与红细胞表面相应受体特异性结合而出现凝集现象，用于检测病毒血凝素、评价病毒活性的方法。3. 4红细胞凝集抑制试验Hemagglutination-inhibition assay, Hl1 DB37/T 2385—2013根据流感病毒血凝素蛋白（HA）可分为17个HA血清型，不同HA亚型病毒之间的抗原差异性显著。利用流感病毒血凝素（HA）具有凝集红细胞的特点，加入型特异性抗体后，使原有的血凝反应被抑制的方法，常利用此方法检测流感病毒的HA亚型、检测流感病毒的抗原特性等。3. 5保存液Storagemedium用于保存样品而配制的特殊溶液。3. 6运输液transport medium用于运输采集样品而配制的特殊溶液。4临床诊断技术4. 1流行病学特点4.1.1各个年龄、性别和品种的猪对本病毒都有易感性。4.1.2传染源主要为病猪和带毒猪，患病痊愈后猪可带毒68周。4. 1. 3病毒的群间传插主要是以感染猪的喷嗽和喷嚏为媒介，经呼吸道感染4. 1. 4本病的流行有明显的季节性，天气多变的秋末、早春和寒冷的冬季易发生。4. 1. 5本病传播迅速，常呈地方性流行或大流行。4. 1. 6本病发病率高，死亡率低（4%10%）4. 2临床症状4. 2. 1本病的发病率高，潜伏期为2～7天，病程1周左右：4. 2. 2发病初期病猪体温突然升高至40.3℃C～41.5℃，厌食或食欲废绝，极度虚弱乃至虚脱，常卧地：4. 2. 3从眼和鼻流出粘液，鼻分泌物有时带血：4. 2. 4病猪挤卧在一起，难以移动，触摸肌肉僵硬、疼痛，出现隔肌控李，呼吸顿：4. 2. 5母猪在怀孕期感染，产下的仔猪在产后25天发病很重，有些在哺乳期及断奶前后死亡。4.3病理变化4. 3. 1喉、气管及支气管充满含有气泡的黏液，黏膜充血，肿胀，时而混有血液，肺间质增宽：4. 3. 2淋巴结肿大、充血：脾肿大：4. 3. 4胃肠黏膜有卡他出血性炎症：4. 3. 5胸腹腔、心包腔蓄积含纤维素物质的液体5病毒分离和鉴定技术5.1材料准备5.1.1样品的采集与保存2 DB37/T 2385—20135.1.1.1健康猪只样品5.1.1.1.1健康猪只采集鼻拭子和/或喉拭子。健康存活猪只的喉试纸一般不容易采集，但被屠宰后的健康猪只的喉试纸比较方便采集，采集时将棉试子深入喉头慢慢旋转涂取喉头内部的液体性样本；采集鼻拭子时，将干棉拭子插入