SN 0295-1993《出口禽肉中杆菌肽残留量检验方法》.pdf

中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0295--93出口禽肉中杆菌肽残留量检验方法杯碟法Method for the determination of bacitracinresidues in poultry meat for export-Cylinder-plate method1993-12~28发布1994-05-01实施中华人民共和国国家进出口商品检验局‧发 布 中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口禽肉中杆菌肽残留量检验方法SN 0295--93杯碟法Method for the determination of bacitracinresidues in poultry meat for export-Cylinder-plate method主题内容与适用范围本标准规定了出口禽肉中杆菌肽残留量的抽样、制样和杯碟测定法。本标准适用于出口冻鸡中杆菌肽残留量的检验。2 引用标准SN 0179出口食品中四环素族抗生素残留量检验方法3抽样和制样3.1检验批以不超过2500件商品为一检验批同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。3.2抽样数量批量，件最低抽样数，件11~2552625015251~1 000201 001～2 5003.3抽样方法按3.2规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取一袋作为原始样品，原始样品总量不少于2kg，放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送交实验室。3.4样品制备从每袋原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放入绞碎机中绞碎均匀，充分混匀，用四分法缩分不少于1kg 试样。装入清洁容器内，加封后，标明标记。3.5样品保存将试样于～18℃冷冻保存。注：在抽样及制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。1994-05-01实施中华人民共和国国家进出口商品检验局1993-12-28批准1 SN 0295-934测定方法4.1方法提要用33%吡啶溶液提取试样中杆菌肽，将提取液再用甲醇提取，经减压浓缩至干，用磷酸盐缓冲液溶解残留物，调整pH 后用杯碟法测定。4.2设备和材料4.2.1培养Ⅲ：内径 90 mm，底部平整光滑的玻璃Ⅲ或塑料皿,并应配有陶瓦盖。4.2.2牛津杯：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10±0.1mm，不锈钢管。4.2.3游标卡尺：测量范围0~200 mm，精度0.02mm，或使用抑菌圈测量仪测量。4.2.4T离心机：转速3000 r/min。4.2.5 旋转式真空浓缩器。4.2.6恒温培养箱：36士1℃。4.2.7高压灭菌器。4.2.8其他：玻璃板，吸管，滴管，茄形瓶等。4.3试剂和培养基4.3.1试剂4.3.1.1吡啶：分析纯。4.3.1.2吡啶溶液：33%。取吡啶33mL，用蒸馏水定容至100mL。4.3.1.3甲醇：分析纯。4.3.1.4磷酸盐缓冲液：5%，pH6.5。称取22.15g无水磷酸氢二钾和27.85g无水磷酸二氢钾溶解于蒸馏水中,定容至 1 000 mL。4.3:1.5氢氧化钠溶液：1mol/L。4.3.1.6磷酸盐缓冲液:1%,pH6.0。称取2.0g无水磷酸氢二钾和8.0g无水磷酸二氢钾溶解于蒸馏水中，定容至1 000 mL4.3.1.7杆菌肽标准品：58IU/mg（卫生部药品生物制品捡定所提供）。4.3.1.8试验菌种：藤黄微球菌（MicrococcusLuteus），菌种号28008（卫生部药品生物制品检定所提供)。4.3.2培养基4.3.2.1增菌用培养基：见附录A第A1章。4.3.2.2基层用培养基：见附录A第A2章。4.3.2.3菌种层用培养基：见附录A第A3章。4.4测定步骤4.4.1工作液制备4.4.1.1杆菌肽标准贮备液准确称取适量的杆菌肽标准品，用1%pH6.0磷酸盐缓冲液配制成100IU/mL的标准贮备液，于冰箱中保存,可使用一周。4.4.1.2杆菌肽标准工作液吸取一定量杆菌肽标准贮备液,用1%pH6.0磷酸盐缓冲液稀释成0.15和0.6IU/mL的工作标准液，以及0.0250.050,0.100，0.200,0.400，0.800IU/mL的稀释液，作为制备标准曲线的标准浓度溶液，0.100 IU/mL的稀释液为参考浓度溶液。以上稀释液均须当日配制。4.4.1.3菌种培养及菌液的制备将试验菌种安瓶上部消毒后敲碎，加入少量增菌用培养基(4.3.2.1)溶解后，移入以上培养基中，混匀后于36土1℃培养24h，再转接至琼脂试管斜面（4.3.2.3），培养16～18h，然后加入适量生理盐2 SN 0295-93水,将菌苔洗下，备用。4.4.2试液制备：准确称取经绞碎混匀的试样10.0g于均质器内，加入17mL吡啶溶液（33%）)，均