NY_T 3081-2017番茄抗番茄黄化曲叶病毒鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3081—2017番茄抗番茄黄化曲叶病毒鉴定技术规程Rule for evaluation of tomato resistance to tomato yellow leaf curl virus2017-10-01实施2017-06-12 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 3081—2017前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出。本标准由全国蔬菜标准化技术委员会（SAC/TC467)归口。本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本标准主要起草人：谢丙炎、冯兰香、杨宇红、苑振川、陈国华、凌键、杨翠荣。- NY/T3081—2017番茄抗番茄黄化曲叶病毒鉴定技术规程1范围本标准规定了番茄抗番茄黄化曲叶病毒（tomatoyelloleafcurlvirus）的鉴定方法和评价方法本标准适用于所有番茄（Solanumlycopersicum L.）品种及材料抗番茄黄化曲叶病毒的室内鉴定及抗性评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义NY/T1858.7界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3. 1番茄黄化曲叶病毒tomatoyellowleaf curl virus，TYLCV属于双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus），病毒粒体为双联体结构，由两个不完整的二十面体组成，无包膜。是一种通过烟粉虱和嫁接传播，可严重危害多种双子叶植物的重要病毒。3. 2 番茄黄化曲叶病tomato yellow leaf curl disease,TYLCD由番茄黄化曲叶病毒引起的番茄病毒病害。病害诊断参见附录A。注：该病害的主要症状是病叶明显变小、皱缩，脉间变黄、叶缘鲜黄，叶片卷曲呈杯状或盘状，植株严重矮化，顶部形似菜花状。4试剂与材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的三级水。4.1MS培养基4.1.1MS液体培养基称取MS干粉（M519)4.43g，蔗糖30g，加水定容至1000mL，搅拌均匀并溶化后，调节pH为5.8，于121℃高压灭菌30min，4℃下保存备用。4.1.2MS固体培养基称取MS干粉（M519)4.43g、蔗糖30g、琼脂粉9g，加水定容至1000mL，搅拌均匀并溶化后，调节pH为5.8，于121℃高压灭菌30min，4℃下保存备用。4.2YEP培养基4.2.1YEP液体培养基称取胰蛋白陈10g、酵母提取物10g、氯化钠5g，加水950mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH为7.0，定容至1000mL，于121℃高压灭菌30min，4℃下保存备用。4.2.2YEP固体培养基1 NY/T 3081—2017称取胰蛋白陈10g、酵母提取物10g、氯化钠5g、琼脂粉9g，加水950mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH为7.0，定容至1000mL，于121℃高压灭菌30min，4℃下保存备用。4.3抗生素母液4.3.1卡那霉素母液(50mg/mL)称取250mg卡那霉素，溶入5mL水中后，在超净台内注5mL的一次性注射器中，经硝酸纤维素膜（孔径0.22um）过滤灭菌，即得50mg/mL卡那霉素母液。分装到5个灭菌的2mL冷冻管里，每管1mL，置2℃～8℃冰箱中保存，可使用1个月；或一20℃长期保存。4.3.2利福平母液（50mg/mL）称取250mg利福平于EP管中，先用少量无水乙醇涡旋振荡以溶解，再加水定容至5mL，然后在超净台内注人5mL的一次性注射器中，经硝酸纤维素膜（孔径0.22μm)过滤除菌，即配成50mg/mL利福平母液。分装到5个灭菌的2mL冷冻管里，每管1mL，置一20℃可保存3个月。4.3.3乙酰丁香酮母液(100mmol/L)称取98.1mg乙酰丁香酮于EP管中，先用少量无水甲醇溶解，再慢慢加水定容至5mL，然后在超净台内注人5mL的一次性注射器中，经硝酸纤维素膜（孔径0.22μm）过滤除菌，即配成100mmol/L乙酰丁香酮母液，分装到5个灭菌的2mL冷冻管里，每管1mL。现用现配，置-20℃保存仅1个月。4.3.4头孢噻钠母液（500mg/mL）称取3g头孢噻钠先溶于6mL灭菌水中，再在超净台内用一次性注射器和硝酸纤维素膜（孔径0.22um）过滤除菌，即配成500mg/mL头孢噻钠母液，分装到6个灭菌的2mL冷冻管里，每管1mL。封严，在阴凉黑暗干燥处保存，不宜超过3d。5仪器设备5.1高压灭菌锅灭菌温度范围：104℃~