SN_T 4033-2014进出口化妆品中施氏假单胞菌检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4033--2014进出口化妆品中施氏假单胞菌检测方法Determination of Pseudomomas stutzeri in cosmetics for import andexport2015-05-01实施2014-11-19 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局查真伪 SN/T 4033—2014前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王小玉、游淑珠、胡松楠、邝筱珊、冯家望、唐食明。I SN/T 4033--2014进出口化妆品中施氏假单胞菌检测方法1范围本标准规定了化妆品中施氏假单胞菌的检测方法本标准适用于各类型化妆品中施氏假单胞菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T7918.1化妆品微生物标准检验方法总则SN/T1538.1培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则SN/T 1538.2培养基制备指南第2部分：培养基性能测试实用指南3培养基和试剂除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯，实验用水应符合相关要求。为保证培养基的质量，宜按照SN/T1538.1和SN/T1538.2对培养基进行质量控制，也可使用符合SN/T1538质量要求的商品化培养基。3.1生理盐水：见 A.13.2 灭菌液体石蜡。3.3灭菌吐温-80。大豆酪蛋白葡萄糖卵磷脂吐温-80(SCDLP)液体培养基：见 A.2。3.43.5假单胞菌 CFC琼脂：见 A.3。胰蛋白陈大豆琼脂（TSA）：见 A.4。3.63.7革兰氏染色试剂：见A.5。3.8氧化酶试剂或氧化酶测试条：见A.6。3.9金氏麦芽糖 OF培养基：见 A.7。乙酰胺培养基:见A.8。3.103.11葡萄糖酸盐培养基：见A.9。硝酸盐蛋白陈水培养基：见A.10。3.123.13束赖氨酸脱羧酶培养基：见 A.11。赖氨酸脱羧酶培养基：见A.12。3.143.15营养明胶培养基：见A.13。淀粉琼脂：见A.14。3.164设备和材料4.1 天平:感量 0.1 g。1 SN/T 4033-20144.2高压灭菌器。4.3旋涡混匀振荡器。4.4三角瓶：250mL，带盖或塞。4.5试管：带盖或塞。4.6无菌吸管或移液器和配套吸头：l mL、5 mL及10 mL。4.7无菌器具：镊子、剪刀、小刀和药匙4.8培养皿:已灭菌,直径 90 mm～100 mm。4.9接种针、接种环。4.10载玻片、盖玻片。4.11研钵或均质器。4.12恒温培养箱:35℃±2℃。5检验程序化妆品中施氏假单胞菌的检验程序见图1。检样10g+90mL灭菌生理盐水90 mL SCDLP增菌35℃±2 ℃,48 h假单胞菌CFC琼脂35℃±2℃,24 h氧化酶试验、革兰氏染色试验、TSI试验金氏麦芽糖OF试验乙酰胺试验葡萄糖酸盐试验硝酸盐还原产气试验明胶液化试验赖氨酸脱羧酶试验精氨酸脱羧酶试验42℃生长试验淀粉水解试验报告结果图 1化妆品中施氏假单胞菌的检测程序2 SN/T 4033—20146　样品制备化妆品中不同类型的检样采用GB/T7918.1中的方法制备成1：10的样品稀释液。检验步骤77.1增菌取1：10样品稀释液10mL接种到90mLSCDIP液体培养基中,置35℃±2℃培养40 h～48 h。7.2选择性分离自上述培养液中，取1～2接种环，划线接种于假单胞菌 CFC琼脂平板中，置 35℃土2℃培养18h～24 h。在假单胞菌CFC分离琼脂平板上施氏假单胞菌菌落呈乳白色、圆形、光滑湿润。7.3鉴定7.3.1氧化酶试验从CFC假单胞菌分离平板上挑取3～5个可疑菌落接种到TSA，35℃土2℃培养24 h±2h，进行氧化酶试验，施氏假单胞菌氧化酶试验为阳性。7.3.2革兰氏染色取可疑菌落纯培养物进行革兰氏染色，施氏假单胞菌为革兰氏阴性杆菌。7.3.3TSI 试验将可疑菌落纯培养物接种于TSI,置于 35℃士2℃培养18h～24h，施氏假单胞菌属于非发酵型(NF)革兰氏阴性杆菌，在TSI的底层和斜面均产碱或不变。7.3.4生化鉴定一般要求在TSI的底层和斜面均为产碱或不变、氧化酶试验阳性的革兰氏阴性杆菌，按～0给出方法进行生化鉴定。经验证符合使用要求的微生物鉴定试剂盒也可用于生化鉴定1’。金氏麦芽糖OF试验将纯培养物接种至金氏麦芽糖OF培养基，35℃士2℃培养18h～24h，施氏假单胞菌可氧化麦