SN 1395.2-2005禽衣原体病琼脂免疫扩散试验操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1395.2--2005禽衣原体病琼脂免疫扩散试验操作规程Protocol of agar gel immunodiffusion test for avian chiamydiosis2005-02-17发布2005-07-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数码脑坊发布 中华人民共和国出人境检验检疫准行业标禽衣原体病琼脂免疫扩散试验操作规程SN/T 1395. 2—-2005*中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. bzcbs. com电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*印张 0.5 字数 ９千字开本 880×1230 1/162005 年5月第次印刷2005年5月第一版*由本社发行中心调换如有印装差错版权专有侵权必究举报电话：（010SN/T 1395.2-2005前 言本标准的附录 A、附录 B 为规范性附录,附录 C 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标推起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标推起草人：颜思通、林志雄、朱道中、郭光楷、刘尚文。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1 SN/T 1395.2--2005禽衣原体病琼脂免疫扩散试验操作规程1范围本标准规定了禽类衣原体病琼脂免疫扩散试验的方法。本标准适用于禽类衣原体抗体的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标推。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3设备、试剂及材料3.1设备3.1.1电热恒温培养箱（37℃）。3.1.2微波炉。3.1.3电子天平，精确度0.01g。3.1.4暗背景观察灯。3.1.5打孔器：7孔1套梅花形金属打孔器，孔径5mm、孔间距3mm。3.2试剂及材料3.2.1蒸馏水符合GB/T6682中三级水的规定。3.2.2 抗原、标准阳性血清按说明书使用。3.2.3被检血清按常规无菌采血、分离血清,被检血清应不溶血、不腐败，4℃保存。3.2.4琼脂糖凝胶制备见附录A，所用PBS见附录B。4 操作方法4.1琼脂糖平板制备将在微波炉加热充分融化的琼脂糖凝胶缓慢倒人平皿中，凝胶厚度约为 3 mm，静置，待凝固后将平血加盖倒置，在4℃保存备用（可保存2周）。4.2琼脂糖平板打孔用梅花形打孔器在琼脂板上按压打孔，参见附录C中图C.1,孔内琼脂用针头小心挑出或用负压吸管吸出，勿破坏周围琼脂；加样前最好将平Ⅲ底部置火焰上轻烤封底。4.3加样参照附录C图C.2的方法加样，中间孔加抗原，被检血清和阳性对照血清间隔加在周围孔内，加样量应充满琼脂孔，但不可溢出。I SN/T 1395.2—20054.4 反应将加完样的琼脂平血加盖后静置片刻，倒置于湿盒中，于37℃恒温箱内反应,24 h和48h用暗背景观察灯各观察一次。5结果判定5.1 阳性当抗原孔与标准阳性血清孔之间出现一条清晰致密的沉淀线，被检血清孔与抗原孔之间出现沉淀线并与标准阳性血清沉淀线平滑连接，则被检血清判为阳性,如图 1。图 15.2阴性被检血清孔与抗原孔之间无沉淀线，标准阳性血清孔与抗原孔之间产生的沉淀线伸向被检血清孔，判为阴性,如图2。图 2若被检血清孔与抗原孔之间有沉淀线，但该沉淀线与标准阳性血清和抗原产生的沉淀线末端交叉或不相连接，为非特异性反应，该被检血清判为阴性，如图3。图 3 SN/T 1395.2—2005附录A(规范性附录)琼脂糖凝胶的制备琼脂糖凝胶的配制：琼脂糖1.0 g氯化钠8.5g1.0%硫柳汞1.0 mL.PBS(0. 01 mol/L,pH 7. 4)99 mL所用试剂均为分析纯。将上述各种成分混合，加热充分溶解，分装，置4℃保存。使用时融化制板，有效期60d。附录B(规范性附录)PBS(0. 01 mol/L,pH 7. 4)的配制氯化钠8g磷酸二氢钠0.2 g磷酸氢二钠(Naz HPO · 12H,O)2.9g氯化钾0.2 g加蒸馏水至1 000 mL所用试剂均为分析纯。将上列试剂完全溶化后过滤、分装，置151b30min高压灭菌，冷却后置4℃保存备用。 1/NSSN/T 1395.2—2005附录C（资料性附录）抗原与血清加样方法OO0T0OO00O0O图 C. 1 平血中梅花形 7 孔一组排列示意图注：Ag为抗原，十为阳性血清。图C.2被检样品加样方法版权专有侵权必究书号：155066·2-16195SN/T