NY_T 3080-2017大白菜抗黑腐病鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3080—2017大白菜抗黑腐病鉴定技术规程Rule for evaluation of chinese cabbage resistance to black rot2017-10-01实施2017-06-12发布中华人民共和国农业部发布 NY/T3080—2017前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草，本标准由农业部种植业管理司提出本标准由全国蔬菜标准化技术委员会（SAC/TC467)归口。本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本标准主要起草人：杨宇红、谢丙炎、冯兰香、杨翠荣、振川、陈国华、凌键，I NY/T3080—2017大白菜抗黑腐病鉴定技术规程1范围本标准规定了大白菜抗黑腐病（Xanthomonascampestrispv.campestris)的鉴定方法和评价方法。本标准适用于大白菜（BrassicarapaL.ssp.pekinensis)抗黑腐病的室内鉴定及抗性评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义NY/T1857.6界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3. 1大白菜黑腐病chinesecabbageblackrot由野油菜黄单胞菌野油菜致病变种[Xanthomonascampestrispv.campestris(Pammel)Dowson]引起的细菌性病害。注：病害表现症状为叶片叶缘形成“V”字形或长条形黄褐色病斑，病斑周围伴有黄色褪绿晕带，病部叶脉坏死变黑部分外叶干枯、脱落，植株茎部、根部的维管束变黑，严重时叶片呈现出以“歪柄”或“半边瘫”等症状为主的大白菜病害。在干燥条件下，病部往往呈现黑色的干腐状，无明显的恶臭味，可区别于软腐病。4试剂与材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的三级水。4.1酵母葡萄糖碳酸钙(YDC)培养基4.1.1液体培养基：酵母膏10g，葡萄糖20g，碳酸钙20g，水1000mL，搅拌均匀并溶化后，酸碱度调至pH7.0，于121℃高压灭菌30min。4.1.2固体培养基：在液体培养基中加人15g~18g琼脂粉。4.2葡萄糖蛋白陈培养基4.2.1液体培养基：葡萄糖5g，蛋白陈10g，水解酪蛋白1g，水1000mL，搅拌均匀并溶化后，酸碱度调至pH7.0，于121℃高压灭菌30min。4.2.2固体培养基：在液体培养基中加人15g~18g琼脂粉。4.3育苗基质将草炭、蛭石和菜田土按2：1：1（体积比）的比例混合均匀，于134℃高温蒸汽灭菌30min。5仪器设备5.1恒温摇床回旋频率范围：40r/min～300r/min；温控范围：5℃～60℃。5.2恒温培养箱温度范围：0℃～50℃；温度波动：士0.5℃。1 NY/T3080—20175.3低温冰柜箱内温度：一15℃～一25℃。5.4灭菌锅温度范围：0℃～135℃；灭菌时间：4min～120min；最高工作压力：0.22MPa～0.25MPa5.5超净工作台洁净等级：100级@≥0.5um；平均风速：0.25m/s~0.6m/s。5.6分光光度计波长范围：200nm~1000nm；波长误差：士1nm；透射比准确度：士0.5%（T）。6黑腐病菌接种体制备6.1病原菌分离、保存6.1.1病原菌分离取大白菜黑腐病发病植株叶片病健交界组织，用常规稀释分离法或平板划线分离法分离黑腐病病原菌。分离物鉴定参照附录A，确认为野油菜黄单胞菌野油菜致病变种（Xanthomonascampestrispv.campestris）后，采用稀释涂布平板法进行分离物纯化，经柯赫氏（KochsPostulates)法则验证后，保存备用。6.1.2病原菌保存将黑腐病菌培养于葡萄糖蛋白陈或YDC液体培养基中，在（28士1)℃、150r/min下振荡培养24h后取培养物于等体积的40%甘油中混合均匀，分装在冻存管内置（一20士1)℃冰柜中保存；或将在葡萄糖蛋白陈或YDC培养基上培养的新鲜黑腐病菌从斜面上洗下或挑下，放人灭菌水中，在室温下保存，6个月重新活化转存1次。6.2生理小种鉴定对用于抗病性鉴定接种的病原菌进行生理小种的鉴定，鉴定方法见附录B。6.3接种体繁殖和制备根据育种目的，有针对性地选择优势小种作为接种病原菌。将保存在灭菌水中的菌种摇匀，移至葡萄糖蛋白陈或YDC液体培养基中，在（28士1）℃、150r/min下振荡培养24h，加适量无菌水调整至接种浓度，制成接种液。7室内抗性鉴定7.1鉴定对照材料设北京小杂56或北京大牛心等易感病品种为感病对照品