NY_T 551-2017鸡产蛋下降综合征诊断技术.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 551—2017代替NY/T551—2002鸡产蛋下降综合征诊断技术Diagnostic techniques for egg drop syndrome2017-06-12 发布2017-10-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 551—2017前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替NY/T551—2002《产蛋下降综合征诊断技术》。与NY/T551—2002相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：“范围”部分增述了产蛋下降综合征病毒PCR检测方法的适用性；-对血凝和血凝抑制试验进行了修改；删除了原标准中血清学诊断内容；-增加产蛋下降综合征病毒PCR检测方法。本标准由农业部兽医局提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。本标准起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标准主要起草人：刘胜旺、李慧昕、韩宗玺、王娟、邵昱昊。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-NY/T551—2002。I NY/T551—2017鸡产蛋下降综合征诊断技术1范围本标准规定了产蛋下降综合征的临床诊断和实验室诊断（病毒分离、血凝和血凝抑制试验及PCR检测方法)的技术方法和实验程序-本标准适用于鸡产蛋下降综合征的诊断、监测和检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T16550新城疫诊断技术NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1产蛋下降综合征eggdropsyndrome，EDS又名减蛋综合征，是由产蛋下降综合征病毒引起的一种无明显症状、仅表现产蛋母鸡产蛋量明显下降的疾病。3. 2产蛋下降综合征病毒eggdropsyndromevirus，EDSv产蛋下降综合征病毒为腺病毒科、腺胸腺病毒属成员，为20面体对称、无囊膜双链DNA病毒。4临床诊断4.1临床症状4.1.1鸡群在产蛋高峰期(27周龄～49周龄)产蛋下降15%～50%，一般持续4周～10周产蛋逐渐恢复到正常水平。4.1.2鸡蛋破损率5%~20%。4.1.3鸡蛋中有较多的畸形蛋、软壳蛋、无壳蛋、薄壳蛋、砂壳蛋，时有水样蛋清，褐壳蛋鸡产浅壳蛋、白壳蛋。4.1.4不同品种鸡感染时，产褐壳蛋的品种减蛋甚于白壳蛋的品种。4.2病理变化本病一般没有明显的特征性病理变化，可见输卵管卡他性炎症，偶见输卵管黏膜水肿和/或腔内有白色渗出物。4.3结果判定鸡群出现4.1中任何一种临床症状和/或剖检出现4.2中的病理变化，可判定为疑似产蛋下降综合征，应进行实验室确诊。5实验室确诊5.1病毒分离1 NY/T551—20175.1.1试剂磷酸盐缓冲液（PBS0.01mol/L，pH7.2），配制方法见附录A的A.1。5.1.2样品的采集和处理按照NY/T541的规定进行样品采集，选择下列1种或2种样品：a）扑杀疑似EDSV感染鸡，取适量输卵管和卵泡膜样品，研磨。加PBS制成1：5混悬液后冻融3次，3000g离心10min，取上清，加人青霉素（终浓度为1000IU/mL）和链霉素（终浓度为1000μg/mL），37℃作用1h。b）采集劣质蛋清，加等量PBS，并加入青霉素（终浓度为1000IU/mL)和链霉素（终浓度为1000μg/mL),37℃作用1h。5.1.3鸭胚接种及尿囊液收获取孵育10日龄～12日龄SPF鸭胚或来自产蛋下降综合征病毒抗体阴性鸭场的非免疫鸭胚，将0.2mL样品（5.1.2)经尿囊腔接种鸭胚，另设接种PBS的鸭胚做对照，37℃孵育。弃掉48h内死亡的鸭胚，收获48h～120h死亡和存活的鸭胚尿囊液。5.2分离物血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验鉴定5.2.1血凝试验材料.196孔V型微量反应板。.2微量移液器。试剂.1EDSV标准抗原。.2磷酸盐缓冲液(PBS,0.01mol/L，pH7.2)，配制方法见A.2。.31%鸡红细胞悬液，配制方法见附录B。血凝试验操作步骤按照GB/T16550的规定执行。.1取96孔V型微量反应板，用微量移液器在1孔～12孔每孔加PBS25μL。.2吸取25μL标准抗原或者待检尿囊液的混悬液加人第1孔中，吹打3次～5次，充分混匀。.3从第1孔中吸取25uL混匀后的标准抗原或者待检尿囊液加到第2孔，混匀后吸取25μL加人到第3孔，依次进行系列倍比稀释到第11孔，最后从第11孔吸取25μL弃之，设第12孔为PBS对照。.4每孔再加25μLPBS.5每孔加人25μL1%的鸡红细胞悬液。.6振荡混匀反应混合液，