NY_T 2297-2012饲料中苯甲酸和山梨酸的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2297—2012饲料中苯甲酸和山梨酸的测定高效液相色谱法Determination of benzoic acid and sorbic acid in feeds-High performance liquid chromatography2012-12-24 发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2297—2012前言本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（成都）。本标准主要起草人：张静、魏敏、王宇萍、赵立军、林顺全、高庆军、冯娅、陈红、程传民。1 NY/T 2297—2012饲料中苯甲酸和山梨酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中苯甲酸和山梨酸的测定。本标准的检测限：苯甲酸和山梨酸均为20mg/kg。本标准的定量限：苯甲酸和山梨酸均为50mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理伺料中的茉甲酸和山梨酸经提取液提取、离心后，取部分上清液经混合型阴离子固相萃取柱净化，用高效液相色谱仪一紫外检测器检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，色谱分析用水符合GB/T6682中二级水的规定。4.1甲醇：色谱纯。4.2甲酸：色谱纯。4.3氨水。4.4亚铁氰化钾溶液（0.25mol/L)：称取亚铁氰化钾[K,Fe(CN)6·3H2O}10.6g，加水溶解并稀释至100 mL.4.5乙酸锌溶液（1.0mol/L)：称取乙酸锌[Zn(CH:COO)2·2HzOJ22g，加人冰乙酸3mL，加水稀释至100 ml。4.6磷酸盐缓冲液（pH=6.7)：分别称取磷酸二氢钾（KHzPO.）2.5g和磷酸氢二钾（K2HPO，·3H20)2.5g，用水溶解后定容至1000mL。4.72%氨水溶液：量取氨水2mL，加水至100mL，混匀。4.85%甲酸甲醇溶液：量取甲酸5mlL,加甲醇至100ml，混匀。4.9流动相：量取磷酸盐缓冲液（4.6)900ml，加入甲醇100ml，混勾。4.10苯甲酸对照品：C,H.O2，纯度≥98%。4.11山梨酸对照品：C,HsO2，纯度≥98%。4.12标准溶液的配制4.12.1标准溶液贮备液：准确称取适量苯甲酸和山梨酸对照品各50.0mg，用甲醇溶解并定容至1 NY/2297--201250mL。此贮备液浓度为1.0mg/mL，2℃～8℃冷藏保存，有效期为3个月。4.12.2混合标准工作溶液：分别准确吸取适量苯甲酸和山梨酸标准溶液贮备液（4.12.1)，用流动相（4.9)配制成浓度分别为2.0μg/mlL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL和50.0μg/mL的混合标准工作溶液，2℃～8℃冷藏保存，有效期为1个月。4.13固相萃取小柱：混合型阴离子交换柱，60mg/3mL，或性能相当者。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2实验用样品粉碎机。5.3天平：感量0.01g。5.4分析天平：感量0.1mg。5.5离心机：转速为5000r/min及以上。5.6超声波清洗器。5.7涡旋混合器。5.8振荡器。5.9密封盖塑料离心管：50ml.。5.10固相萃取装置。5.11滤膜：0.45μm,有机系。6试样的制备按GB/T14699.1的规定采集试样后，按GB/T20195的规定选取具有代表性的实验室样品1kg，四分法缩减分取200g左右，粉碎过0.45mm孔筛，混勾装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1提取准确称取试样2g（精确至0.01g），置于离心管（5.9)中，准确加入2%氨水溶液（4.7)21mL，超声提取10min，振荡提取10min，准确加人亚铁氰化钾溶液（4.4)2mL、乙酸锌溶液（4.5)2mL，涡旋混匀，以5000r/min离心5min。精密吸取上清液5ml.于25ml容量瓶，用2%氨水溶液（4.7）定容，备用。7.2净化依次用甲醇3ml、水3ml活化固相萃取小柱（4.13），精密吸取提取液5.0mL过此小柱。再依次用2%氨水溶液（4.7)3mL和甲醇3mL淋洗，抽干小柱，用5%甲酸甲醇溶液（4.8)2.0mL洗脱，洗脱液过0.45μm滤膜后，