SNT 2206.2-2009化妆品微生物检验方法 第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽胞杆菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2206.2—2009化妆品微生物检验方法第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌Determination of microbiological in cosmetics-Part 2 : Aerobic spore-former bacteria and Bacillus cereus2009-09-01实施2009-02-20 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2206. 2--2009前言SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为以下部分：一第1部分：沙门氏菌；第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌；第3部分：肺炎克雷伯氏菌;第4部分：链球菌；第5部分：肠球菌。本部分为SN/T2206的第2部分。本部分的附录 A和附录 B均为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国新疆出人境检验检疫局中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本部分主要起草人：杨捷琳、顾鸣、韩伟、黄玲、许龙岩。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准 SN/T 2206.2-2009化妆品微生物检验方法第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌1 范围SN/T2206的本部分规定了化妆品中尤其是水分含量较少的粉类化妆品中需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的检验方法。本部分适用于化妆品中需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2206的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T7918.1化妆品微生物标准检验方法’总则SN/T0176出口食品中蜡样芽孢杆菌检验方法3材料和设备3.1 三角瓶:250 mL。3.2玻璃珠。3.3L形玻璃棒。3.4刻度吸管:1 mL,10 mL3.5均质器。3.6恒温培养箱:36℃±1℃,30℃±1℃,32℃=253.7高压灭菌器。3.8振荡器。4培养基和试剂4.1D/E中和培养基(Dey/Engley~中和培养基），见附录A第A.1章。4.2甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基(MYP)，见附录 A第A.2章。4.3葡萄糖蛋白陈琼脂(DT培养基,加中和剂），见附录 A第 A.3章。4.4API检测试纸条或其他等效产品注：API测试条是由法国梅里埃公司提供的产品的商品名，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的唯一认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。5检验程序5.1化妆品中需氧芽孢杆菌检验流程图见图1。 SN/T 2206.2—2009检样10g制成1:10样品稀释液检验样品温度对照管空自对照取合适浓度样品悬液，按1:10加入融化装有等体积蒸馏水及温度计的温度加入等体积融化的葡萄糖蛋白腑的葡萄糖蛋白陈琼脂琼脂对照管将样品及对照放入沸水浴15min1轻微搅拌冷却至50℃～60℃等量倾注5块平板倒置30℃±1℃，培养5d菌落确证,计数及结果报告图1化妆品中需氧芽孢杆菌检验流程图5.2化妆品中蜡样芽孢杆菌检验流程图见图2。检样10g制成1:10样品稀释液0.1 mL 涂布MYP平板葡萄糖蛋白陈琼脂平板1挑取可疑菌落，染色镜检证实实验1计数及结果报告图2化妆品中蜡样芽孢杆菌检验流程图5.3样品制备样品参照GB/T7918.1供检样品的制备方法进行。样品制备时，也可参照附录A第A.1章的D/E中和培养基代替生理盐水或 SCDLP培养基。参照附录B中列出的化妆品中常用防腐剂种类及微生物检验时所使用的中和剂种类和配方，可根据不同产品成分参照使用。5.4取1：10稀释液10.0mL加人到含有90.0mL生理盐水的稀释瓶中，置 30℃士1℃水浴中15min，经常振摇，取出后静置15min，取上清液10.0mL制成1：100的稀释液，每个稀释度换用一支10.0mL无菌吸管，按上述操作程序递增十倍稀释至合适浓度。5.5需氧芽孢菌计数5.5.1移取合适浓度样品悬液10mL,搅拌加人融化的葡萄糖蛋白陈琼脂100mL，混合均匀，沸水浴15min，轻微搅拌冷却至50℃～60℃，再将混合物等量倾注5块平板，待凝固后表面覆盖一薄层2%灭菌琼脂（防止蔓延型菌落出现），待覆盖琼脂凝固后，倒置30℃士1℃，培养5d。2 SN/T 2206.2—20095.5.2选取平板上10个以上菌落，进行革兰氏染色镜检，芽孢菌应为革兰氏阳性杆菌，有明显芽孢体存在，氧化酶、触酶实验，需氧芽孢菌多为阴性，进一步采用 API等生化鉴定试剂条进行鉴定。5.5.3计数：计数五个平板上的