SNT 1868-2007进出口油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1868—2007进出口油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定方法Determination of total glucosinolates in rapeseedand its meal for import and export2007-04-06 发布2007-10-16 实施质核激相0病变最尚真体中华人民共和国发布“数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1868—2007前言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：倪昕路、褚庆华。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1868—2007进出口油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定方法1 范围本标准规定了进出口油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定方法。本标准适用于油菜籽及其饼粕中硫代葡萄糖苷总量的测定。2　测定方法2.1　方法提要样品加热使自然态酶灭活，经沸水提取后，用弱阴离子交换树脂柱层析净化，添加黑芥子硫苷酸酶水解硫代葡萄糖苷得到葡萄糖并用水洗脱。加人葡萄糖显色试剂，使样品溶液呈色，在505nm波长测定吸光度。根据葡萄糖标准曲线校正，计算样品中硫代葡萄糖苷总量。2.2试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯，水为蒸馏水。2.2.1无水磷酸氢二钠。2.2.2氯化钠。2.2.3钨酸钠。2.2.4苯酚。2.2.5浓盐酸。2.2.6　弱阴离子交换树脂,DEAE Sephadex A-25。2.2.7氢氧化钠。2.2.8冰乙酸。2.2.9无水乙酸钠。2.2.10三羟甲基氨基甲烷。2.2.11黑芥子硫苷酸酶（EC47），活力单位200U/g。2. 2. 124-氨基安替吡啉。2.2.13葡萄糖氧化酶（EC），活力单位20000U/66.67mg。2.2.14过氧化物酶(EC)，活力单位10000U/52.6mg。2. 2.15盐酸溶液(2 mol/L）：量取17.2 mL浓盐酸倒人100 mL水中。2.2. 16苯酚-钨酸溶液：称取5.0g钨酸钠、5.0g无水磷酸氢二钠和9.0g氯化钠于500mL容量瓶中，用约350mL水溶解，用2mol/L盐酸溶液调节 pH至 3.0,加人 2.0 g苯酚，用水定容至500 mL。2.2.17氢氧化钠溶液（0.5mol/L)：称取20g氢氧化钠溶解于约800 mL水中，以水定容至1L。2.2.18乙酸钠缓冲液（0.2mol/L)：称取16.5g无水乙酸钠和11.5ml冰乙酸溶解于约950mL水中,用 2 mol/L盐酸溶液调节 pH至 4.9,用水定容至 1 L。2.2.19Tris-HCl缓冲液：称取 1.6g三羟甲基氨基甲烷溶解于约 900 mL水中，用2 mol/L盐酸溶液调节 pH 至 7.0,用水定容至 1 L。2.2.20黑芥子硫苷酸酶溶液：称取500mg黑芥子硫苷酸酶于10mL容量瓶中，加水溶解并定容，实验当日制备。2.2.21葡萄糖显色溶液：称取10g无水磷酸氢二钠于盛有约750mL水的1L容量瓶中，加人131.7mg葡萄糖氧化酶于容量瓶中并摇匀；称取16.7mg过氧化物酶和333mg4-氨基安替吡啉于盛 SN/T 1868—2007有约10mL水的烧杯中并搅拌使其溶解，移入容量瓶并用水定容；溶液保存在棕色瓶中并于4℃冷藏。2.2.22 苯甲酸。2.2.23无水葡萄糖标准品：纯度≥99%。2.2.24葡萄糖标准储备液：将无水葡萄糖于40℃真空烘箱中干燥4h。冷却后称取1.0000g葡萄糖于烧杯内，加入1g苯甲酸防腐，用水溶解并转移至1L容量瓶内，用水稀释定容。葡萄糖储备液中葡萄糖浓度为5.56 μmol/mL。2.2.25试管:13 mmX100 mm,具有螺旋盖。2.2.26 Poly-prep 层析柱:称取 0.1 g(准确至 0.001 g)DEAE Sephadex A-25 树脂装填人 Poly-prep层析柱。柱下装好活塞，使活塞处于关闭。在每支层析柱上沿柱壁加人10 mL水,打开活塞，使约2 mL水流过柱的填充料部分。关上活塞，将层析柱加盖，放置过夜，使层析柱内填充物膨润。打开活塞，依次用下列溶液淋洗层析柱使其活化ml05mol/t氢氧花钠溶液、10 mL水、5mL乙酸钠缓冲液、社加盖准备加人样品。10 mL水,并使排干。关上活塞2.2.27Poly-prep 柱双向活塞2.2.28层析柱盖帽。2.2.29容量瓶,10 mL。2.3仪器设备2.3.1电子天平：感量0.0001g和0,001。2.3.2真空烘箱。2.3.3，恒温水浴。紫外/可见分光光度计。.5粉碎机或相当的设备。2. 3. 6试管加热器或相当的设备离心机:转速5 000 r/min分析步骤2.4.1样品制备