NY_T 2006-2011谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定.pdf

ICS 67.060B 22NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2006--2011谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定Determination of β-glucan in cereal and its products2011-09-01 发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2006-—2011前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准修改采用AOACOfficialMethod995.16-6一《大麦和燕麦中的β-D-葡聚糖--改进酶法》（英文版）。本标准修改采用时主要技术内容修改如下：增加了规范性引用文件；扩大了标准的应用范围，增加了谷物种类以及谷物饮料等加工制品。本标准由中华人民共和国农业部农产品加工局提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院农产品加工研究所、中国农业大学、北京特品降脂燕麦开发公司、郑州轻工业学院。本标准主要起草人：王强、周素梅、吴广枫、吕耀昌、申瑞玲、刘红芝、林伟静、路长喜I NY/T2006—2011谷物及其制品中β-葡聚糖含量的测定1范围本标准规定了谷物及其制品中β-葡聚糖含量的酶一比色测定方法。本标准适用于燕麦、大麦、青稞、黑麦等谷物及其加工制品（面粉、麸皮、麦片、饮料等)中β-葡聚糖含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB5009.3食品安全国家标准食品中水分的测定GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理该法利用地衣聚糖酶(或称葡聚糖酶)和β-葡萄糖苷酶对样品中(1-3)(1-4)-β-D-葡聚糖(混联β-D-葡聚糖,或简称β-葡聚糖)的酶解作用，由地衣聚糖酶专一性地水解β-葡聚糖成寡糖，β-葡萄糖苷酶则将寡糖水解成葡萄糖；葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶作用下，与4-氨基安替比林氧化缩合生成红色醒类化合物。此化合物在510nm有吸收，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用经确认的分析纯试剂，实验用水应符合GB/T6682中三级水的要求。4.150U/mL地衣聚糖酶溶液将1mL地衣聚糖酶溶液（1000U/mL)用磷酸钠缓冲液（20mmol/L、pH6.5)稀释至20.0mL，把酶液等分成4份，每份5mL,置于聚丙烯塑料瓶中，在一20℃下冷冻保存，备用。【注：地衣聚糖酶活力单位定义为：在pH6.5、40℃条件下，每分钟从大麦β-葡聚糖(10mg/mL)中释放出相当于1μmol/L葡萄糖还原糖当量所需的酶量，即为1U。】4.22U/mLβ-葡萄糖苷酶溶液将1mLβ-葡萄糖苷酶溶液（40U/mL)用乙酸钠缓冲液（50mmol/L、pH4.0)稀释至20mL，把酶液等分成4份，每份5mL，置于聚丙烯塑料瓶中，在一20℃下冷冻保存，备用。【注：β-葡萄糖苷酶活力单位定义为：在pH4.0、40℃条件下，每分钟从对-硝基苯基-β-葡萄糖苷(10mmol)中释放出相当于1μmol/L对-硝基苯酚所需的酶量，即为1U。】4.3葡萄糖氧化酶一过氧化物酶一缓冲液混合物内含葡萄糖氧化酶(12000U/L)、过氧化物酶(650U/L)、4-氨基安替比林(0.4.mmol/L)。注：葡萄糖氧化酶活力单位定义为：在pH5.1、35℃条件下，每分钟氧化1mmol葡萄糖所需的酶量，即为1U；过氧化物酶活力单位定义为：在pH6.0、20℃条件下，20s内使焦性没食子酸生成1.0mg红梧酚所需的酶量，即为1U。缓冲液的配制：称取13.6gKH2PO4、4.2gNaOH和3.0g4-羟基苯甲酸，溶于水中，调节pH7.4，定容至100mL。4. NY/T 2006--2011葡萄糖氧化酶一过氧化物酶一缓冲液混合物的配制：取50mL缓冲液稀释至1000mL；用该稀释缓冲液溶解葡萄糖氧化酶一过氧化物酶混合试剂，使之达到所需浓度。该混合试剂在4℃下可稳定存放2个～3个月，一20℃下可稳定存放2年～3年，与葡萄糖反应所形成的颜色可稳定数小时。4.450%乙醇溶液4.520mmol/L、pH6.5磷酸钠缓冲液称取3.12gNaHzPO4·2H2O，加900mL水溶解；调节pH6.5，定容至1000mL。该缓冲液在4℃下可存放一个月。4.6乙酸钠缓冲液4.6.1200mmol/L、pH4.0乙酸钠缓冲液：取7.6mL冰醋酸于900mL水中，加人4.8g三水乙酸钠，溶解；调节pH4.0，定容至1000mL。4.6.250mmol/L、pH4.0乙酸钠缓冲液：取250mL200mmol/L、pH4.0乙酸钠缓冲液稀释至1000mL.4.7