SN_T 3378-2012玩具细菌总数检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3378—2012玩具细菌总数检测方法Methods of microbiological examination for toys-Determination of aerobic bacterial count2012-12-12 发布2013-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局0企医森享书 SN/T 3378—2012言前本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孙震、张西萌、郑如兰、曾静。1 SN/T 3378—2012玩具细菌总数检测方法1 范围本标准规定了玩具细菌总数检测方法。本标准适用于下列玩具及玩具材料的检测：软性造型黏土；玩具中含有的液体、膏体、油灰-凝胶和粉末；一玩具填充物;-玩具上使用的动植物天然材料（如：羽毛、皮革制品等）；玩具化妆品;供3岁及以下儿童使用的玩具；与食品一起售卖的玩具。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件2.1细菌总数文 aerobic bacterial count玩具检样经过处理，在一定条件下培养启（如：养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），1g（或25cm²表面上)所形成菌落的总数。本标准规定的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的细菌菌落总数。2. 2填充物 stuffing materials填充于玩具及儿童用品内部使之呈现出预定形状的材料生要包括！各类人造或天然纤维、泡沫、海绵、塑料颗粒、种子、纸等。不包括发声、动力、支撑、电子元器件等功能性部件。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1恒温培养箱：36℃±1℃。3.2恒温水浴箱：46℃±1℃。3.3均质器。3.4振荡器。3.5无菌吸管：1mL(具有0.01mL刻度）、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。3.6无菌一次性平皿:直径 90 mm。3.7无菌均质袋。3.8无菌试管:18 mmX180 mm。3.9无菌棉拭子。 SN/T 3378—20123.10灭菌刀、剪子、镊子等。3.11 天平:感量0.1 g。3.12放大镜或（和)细菌菌落计数器或自动判读仪。3.13pH计或 pH 比色管或精密pH试纸。4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基：参见第A.1章。4.20.85%灭菌生理盐水：参见第 A.2章。4.3灭菌液体石蜡。4.4灭菌吐温-80。4.5 75%乙醇。4.6细菌总数测试片和压板。5取样方法5.1 玩具中含有的液体5.1.1水溶性液体：称取10mL原液于无菌均质袋中，加入90ml无菌生理盐水制成1：10的样品匀液。5.1.2油性液体：称取10ml原液置于锥形瓶内，加人5ml.灭菌液体石蜡混匀，再加人10ml.灭菌吐温80。在46℃士1℃水浴箱中振荡混合10min，加人75ml.灭菌生理盐水（在46℃±1℃水浴中预温），在46℃士1℃水浴中乳化，制成1：10的样品匀液。5.2玩具化妆品、软性造型黏土及玩具中含有的膏体、油灰、凝胶和粉末5.2.1亲水性样品：称取10g样品置于盛有90mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min,制成1：10 的样品匀液。5.2.2疏水性样品：称取10g样品置于锥形瓶中，加人10mL灭菌液体石蜡、10ml灭菌吐温80和70ml灭菌生理盐水，用拍击式均质器拍打3min～5min，制成1：10的样品匀液。5.3塑料、纺织品、皮革、木材、纸张等材料用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在玩具材料的各个面有顺序的来回涂抹25cm²（5cm×5cm），用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人10mL生理盐水内，将放有棉拭子的试管充分振荡混匀，每1mL菌液为1：10的稀释液。5.4除液体外的玩具填充物用灭菌剪子将样品剪碎，称取10g样品置于盛有90ml.生理盐水的无菌均质袋内，使用振荡器震荡10min，充分混匀，制成1：10的样液。待样液自然沉淀后，取上层清液备用。5.5其他材料用灭菌剪子将样品剪碎，称取10g样品置于盛有90mL生理盐水的无菌均质袋内，使用振荡器振荡10min，充分混匀，制成1：10的样品匀液。2 SN/T 3378--2012第一法平板细菌菌落计数法6检测方法6.1样品的稀释6.1.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品勾液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。6.1.2按6.1.1操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1m