NY_T 1156.18-2013农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第18部分：井冈霉素抑制水稻纹枯病菌试验 E培养基法.pdf

ICS 65.100B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1156.18-2013杀菌剂农药室内生物测定试验准则第18部分：井冈霉素抑制水稻E培养基法纹病菌试验Pesticides guidelines for laboratory bioactivity testsPart 18 : E-medium test for determining jinggangmycin inhibition ofRhizoctonia solani Kihn growth on rice2013-05-20 发布2013-08-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1156.18--2013前言NY/T1156《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》为系列标准：第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法；第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平皿法；第3部分：抑制黄瓜霜霉菌病菌试验平皿叶片法，第4部分：防治小麦白粉病试验盆栽法；第5部分：抑制水稻纹枯病菌试验蚕豆叶片法；第6部分：混配的联合作用测定SHIG第7部分：防治黄瓜霜霉病试验”盆栽法；第8部分;防治水稻稻瘟病试验：盆栽法；S第9部分：抑制灰霉病菌试验“叶片法；RE一第10部分：防治霉病试验盆栽法；-第11部分：防治瓜类白粉病试验盆栽法第12部分：防治晚疫病试验盆栽法；i第13部分：抑制晚疫病菌试验叶片法；第14部分防治瓜类炭疽病试验盆栽法；第15部分：防治麦类叶锈病试验·盆栽法；C第16部分：抑制细菌生长量试验浑浊度法；，-第17部分：抑制玉米丝黑穗病菌试验浑浊度-酶联板法：.--第18部分：井冈霉素抑制水稻纹枯病菌试验E培养基法；本部分是《农药内生物测定试验准则杀菌剂》的第18部分。本部分按照GB/T=1:1一2009给出的规则起草。本部分由农业部种植业管理司提出并归口。本部分起草单位：农业部农药检定所。本部分主要起草人：朱春雨、刘西莉、吴新平、张文君、张楠、黄中乔，聂东兴1 NY/T 1156. 18--2013农药室内生物测定试验准则杀菌剂第18部分：井冈霉素抑制水稻纹枯病菌试验E培养基法1范围本部分规定了E培养基法测定井冈霉素对水稻纹枯病菌生物活性的基本要求和方法。本部分适用于井冈霉素对水稻纹枯病菌生物活性测定的农药登记试验。2仪器设备2.1电子天平（感量0.1mg);2.2生物培养箱；f2.3压力蒸汽灭菌器；2.4移液管或移液器；2.5 培养皿（90mm）2.6接种器、打孔器。3试剂与材料3.1试剂方法所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯；水为蒸馏水。3.2生物试材供试靶标为水稻纹枯病菌（RhizoctomiasotaniKuihn），选用野生敏感型菌株，记录菌种来源。根据试验国的和要求把菌种预先接种在PDA培养基上培养至适用期。3.3培养基及其他试材准备3.3.1E培养基：KzHP):2g、KH²PO2g、葡萄糖10g、琼脂粉（凝胶强度/1300g/cm²）12g，蒸馏水定容至1000ml，115℃离压湿热灭菌15min备用。3.3.2PDA培养基马铃薯200g、葡萄糖18g、琼脂粉（凝胶强度1300g/cm3)12g，蒸馏水定容至1000ml，121℃高压湿热灭菌20min备用。锥形瓶、玻璃棒、移液管、培养皿、打孔器、接种器等灭菌后备用。3.4药剂3.4.1试验药剂井冈霉素A含量不低于60%的原药，并注明生产厂家。3.4.2对照药剂对照药剂采用已登记注册且生产上常用药剂的原药。对照药剂的化学结构类型或作用方式应与试验药剂相同或相近。4试验步骤4.1药剂配制井冈霉素直接用无菌水溶解，其他对照药剂选用经预备试验对菌丝生长无影响的适合溶剂（如甲1 NY/T 1156.18-2013醇、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚矾等)溶解，用0.1%的吐温80或其他适合的表面活性剂水溶液稀释。根据药剂活性，设置5个～7个系列质量浓度，有机溶剂最终浓度不超过0.5%。4.2药剂处理及含药平板制备在无菌操作条件下，根据试验处理将预先融化的灭菌E培养基定量加入无菌锥形瓶中，从低浓度到高浓度依次定量吸取药液，分别加人上述锥形瓶中，充分摇匀。然后分别倒人4个培养皿中，每血15mL，制成相应浓度的含药平板。试验设不含药剂的处理作空白对照，每处理不少于4个重复。4.3接种菌饼准备将水稻纹枯病菌预先接种于PDA平板中央，于25℃培养48h，得到以接种中心为圆心的菌落，在菌落生长边缘进行划界，以位于菌落生长边缘的划界处为最佳待测毒力区域。继续培养18h后，在待测毒力区域打取菌饼以保证菌饼的菌龄适宜（图1）。生长边界培养皿接种中心·菌落打取的菌饼图1接种菌饼准备示意图4.4接种将制备好的菌饼，在无菌条件下分别接种于含有不同浓度井冈霉素的E培养基平板中央，菌丝面朝下，盖上血盖，置于25℃培养箱，黑暗条件下培