NY_T 2641-2014植物源性食品中白黎芦醇和白黎芦醇苷的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.01B 05NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2641—2014植物源性食品中白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定高效液相色谱法Determination of resveratrol and polydatin in plant origin products-High performance liquid chromatography2014-10-17发布2015-01-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2641—2014前言本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：四川省农业科学院分析测试中心、农业部食品质量监督检验测试中心（成都）。本标准主要起草人：雷绍荣、胡莉、郭灵安、仲伶俐、毛建霏、杨晓凤、侯雪。I NY/T2641—2014植物源性食品中白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了植物源性食品中白藜芦醇及白藜芦醇苷的高效液相色谱测定方法。本标准适用于植物源性食品中白藜芦醇及白藜芦醇苷含量的测定。本标准白藜芦醇及白藜芦醇苷的检出限均为1.0mg/kg，定量限均为3.0mg/kg2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样经乙醇一水溶液匀浆提取后定容.用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为GB/T6682规定的一级水4.1无水乙醇(C.H()H)：色谱纯4.2甲醇(CH()H)：色谱纯。4.3提取溶液：无水乙醇+水=3+2(V+V）.取300ml.无水乙醇和200ml.水混匀。4.4白藜芦醇（resveratrol)：CAS号501-36-0.纯度≥96%。4.5白藜芦醇苷（polydatin）:CAS号65914-17-2,纯度≥96%。4.6标准储备溶液：分别准确称取白藜芦醇和白藜芦醇苷标准品5.0mg.用甲醇溶液溶解并定容至10mL，即为500mg/I.的单标储备液，于一18℃下.存于密闭的棕色玻璃瓶中.保存有效期为3个月。4.7混合标准使用液：在使用中将标准储备液混合.并逐级稀释成0.5mg/L.、1.0mg/1、5.0mg/L、25.0mg/I、50.0mg/L或其他浓度的白藜芦醇和白藜芦醇苷混合标准使用液。4.8滤膜：0.45um.有机相滤膜。5仪器与设备5.1高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2天平：精度0.01mg.0.01g5.3匀浆机。5.4粉碎机。1 NY/T2641—20146分析步骤6.1试样制备采用四分法分取样品，含水率高的样品.如新鲜蔬菜、水果等，取约200g于匀浆机中勾浆；含水率低的样品.如花生、谷物等.进行粉碎，过250um的筛。所有样品在一18℃条件下保存。6.2提取6.2.1含水率高的样品：称取20.0g样品于100ml离心管中，加人10mL无水乙醇后在高速匀浆机中匀浆提取2min后。于4000r/min离心10min.将上清液转人50mL容量瓶中，样品残渣再分别用10ml无水乙醇提取2次.合并3次提取液.用无水乙醇定容至50ml.摇匀后用0.45μm滤膜过滤.待测。6.2.2含水率低的样品：称取10.0g样品于100ml离心管中，加人15mL提取溶液（4.3）在高速匀浆机中匀浆提取2min后，于4000r/min离心10min，将上清液转入50mL容量瓶中，样品残渣再分别用10ml.提取溶液（4.3）提取2次，合并3次提取液，用提取液（4.3)定容至50mL摇匀后用0.45um滤膜过滤，待测。6.3测定6.3.1色谱参考条件a)色谱柱：Cis柱，250mmX4.6mm，5.0μm，或性能相当者；b)流动相A为水;B为甲醇；c)检测波长：306nm；d)柱温：45℃；e)进样量：10uL；g)梯度洗脱条件，见表1。表1梯度洗脱表时间.min流速，mL/min流动相A，%流动相1B.%0. 00. 865.035.05. 00. 840. 060. 011. 00. 810.090.015. 00. 00.8100.016. 00. 865.035. 020. 00. 865. 035. 06.3.2色谱分析分别将标准溶液和试样溶液，注人液相色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定