SNT 1961.2-2007食品中过敏原成分检测方法 第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.2-2007食品中过敏原成分检测方法第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分Detection of allergen components in food--Part 2 : Protocol of the real-time fluorescent PCR for detecting peanut component2007-08-06发布2008-03-01实施中华人民共和国浙涂层技号发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准食品中过敏原成分检测方法第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分SN/T 1961.2—2007*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张0.5字数8千字2007年11月第一版　2007年11月第一次印刷印数 1--2 000书号：155066·2-18243 SN/T 1961.2--2007言前SN/T1961《食品中过敏原成分检测方法》分为两个部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分本部分为SN/T1961的第2部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张霞、高旗利、罗茂凰、郑文杰、张海滨、张海英、黎径。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1961.2—2007食品中过敏原成分检测方法第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分1 范围SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原花生成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于检测糕点、糖果、冰淇淋等食品中过敏原花生成分，其他食品可参照使用。2术语、定义和缩略语2.1术语和定义下列术语和定义适用于SN/T1961的本部分。2.1.1实时荧光 PCR real-time fluorescent,PCR实时荧光 PCR是指在 PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个 PCR过程，最后通过荧光信号的增幅进行定性分析。2.2缩略语下列缩略语适用于SN/T1961的本部分。2.2.1Ct值:C:cycle,T：threshold,每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。2.2.2 PCR:polymerase chain reaction,聚合酶链式反应,简称 PCR。2.2.3 DNA:deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。2.2.4 dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷三磷酸。2.2.5dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸2.2.6dCTP:deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。2.2.7 dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。2.2.8dTTP:deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。2.2.9 dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。UDG:uracil DNA glycosylase,尿嘧啶 DNA-糖基化酶。2.2. 102.2. 11bp:base pair,碱基对。 Taq:Thermus aquaticu，水生栖热菌。2.2.12Tris:tris(hydroxymethyl)aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。2.2. 13TE:Tris-HCl、EDTA缓冲液。2.2. 143检测方法3.1方法提要食品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板进行实时荧光PCR扩增，检测食品中是否存在过敏原花生成分。3.2试剂和材料除另有规定外，试剂为优级纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水。3.2.1CTAB 缓冲液:55 mmol/L CTAB、1 400 mmol/L 氯化钠（NaCl)、20 mmol/L EDTA、100 mmol/L Tris,用10%盐酸(HCl)调 pH至8.0,121℃,20 min高压灭菌,储存于2℃～8℃备用。 SN/T 1961.2--20073.2.2TE缓冲液:10 mmol/L Tris、150 mmol/L氯化钠(NaCl)、2 mmol/L EDTA、1%十二烷基磺酸钠，用10%HCl调pH至8.0,121℃，20min高压灭菌，储存于2℃～8℃备用。3.2. 3蛋白酶 K(20 mg/mL)。3.2. 4RNA 酶溶液(5 μg/μL)。3.2.5Tris 饱