NY_T 3344-2019苹果腐烂病抗性鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3344—2019苹果腐烂病抗性鉴定技术规程Technical code of practice for evaluation of apple cultivars for resistance toValsa canker disease2019-01-17 发布2019-09-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3344—2019前言本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所。本标准主要起草人：徐成楠、周宗山、冀志蕊、迟福梅、张俊祥、王娜、乔壮。I NY/T3344—2019苹果腐烂病抗性鉴定技术规程1范围本标准规定了苹果树抗腐烂病鉴定的术语和定义、接种体制备、室内鉴定技术和病情调查。本标准适用于苹果不同栽培品种资源及野生资源、杂交群体的室内人工接种鉴定和评价。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1苹果树腐烂病appleValsacanker由苹果黑腐皮壳菌(ValsamaliMiyabeetYamada)侵染导致枝干树皮腐烂的侵染性真菌病害（病原菌生物学性状参见附录A)。2. 2人工接种artificial inoculation在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体适宜部位并引起发病的方法。2. 3病情级别disease rating scale人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。2. 4抗病性鉴定evaluation of disease resistance通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抗性水平。2. 5抗性评价evaluation of resistancelevels根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度的抗性水平描述。3接种体制备3.1病原物分离以常规组织分离法，从发病苹果枝干的典型病斑上分离腐烂病病原菌。分离物经形态学观察和分子鉴定确认为苹果树腐烂病菌后，在4℃下保存备用。3.2接种体繁殖病菌分生孢子的获取：采集田间二年生苹果枝条，枝条直径约为8mm，截成8cm长短的枝段，取3枝～4枝装入250mL三角瓶中并加人3mL～4mL蒸馏水，湿热灭菌备用。将分离获得的腐烂病菌菌株在马铃薯琼脂培养基（PDA)上25℃培养7d备用。用4mm打孔器取菌饼3个～4个，置于三角瓶内的灭菌无伤苹果枝条上，25℃光暗交替保湿培养15d30d。待离体苹果枝条上形成子实体并涌出黄色分生孢子角时，用灭菌移植针挑取分生孢子，并用无菌水制成浓度约为1×106个孢子/mL的接种悬浮液。4　室内鉴定4.1鉴定室1 NY/T3344—2019室内离体枝条抗病性鉴定的鉴定室能够人工调节室内温度和光照，使其可提供良好的发病环境条件，即室温为25℃、12h光暗交替进行培养。4.2鉴定接种待鉴定材料采用3次重复，每重复10个枝条，以红富士健康树枝条接种腐烂病菌为对照。鉴定接种：田间采集用于进行抗病性鉴定苹果品种的健康、长势一致、无侧枝二年生枝条，截取长度为30cm并两端蜡封，每枝段用4mm打孔器打4个孔，均在枝条正面，每孔间距为6cm，除去孔内外表皮，留少量韧皮部，每孔滴加5μL纯氨水。待氨水风干后，每孔接种10μL孢子悬浮液，将枝段放人垫有湿纱布的糖瓷盘中，用保鲜膜覆盖保湿，放入环境温度为25℃的培养室中12h光暗交替培养。5 病情调查5.1调查时间与方法接种3d～4d后进行发病情况调查，用刀片刮除枝条接种点周围树皮，全部露出病菌在木质部表面扩展病斑，用直尺对病斑扩展长度进行纵向测量。5.2抗病性级别划分苹果离体枝条腐烂病扩展长度及其相对应的抗性标准见表1。表1苹果树腐烂病在离体苹果枝条发病分级标准严重度划分标准，mm病情级别0病斑扩展长度515病斑扩展长度≤10310病斑扩展长度≤15515病斑扩展长度≤20720病斑扩展长度≤259病斑扩展长度255.3病情分级调查病情指数(DI)按式(1)计算。(sXn)DI =X 100(1)NXS式中：DI苹果腐烂病病情指数；M-各病情级别数值与相对应的各病情级别植株数乘积的总和；各病情级别数值；Ln各病情级别的病斑数；N调查的总病斑数；S病情级别的最高数值。5.4抗病性评价标准依据试验材料3次重复的病情指数(DI)平均值确定不同苹果资源品种对腐烂病的抗性水平，划分标准见表2。表2苹果树腐烂病抗性评价标准抗性评价病情指数(DI)DI=0免疫(I)高抗(HR)0D≤112 NY/T 3344—2019表2 (续)病情指数(DI)抗性评价11D≤33抗病(R)33DI55中抗(MR)55DI≤77感病(S)DI77高感(HS)注：对照感病品种富士的病情指数DI77作为有效性评价的依据。5. 5鉴定结果报告相关鉴