SN_T 4181-2015甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4181—2015甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Ramularia beticola2015-09-01实施2015-02-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局982312查真伪 SN/T 4181-2015前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：杨立群、张洪祥、刘忠梅、程阳、严进、刘洪义、孟玉芹、聂文革。I SN/T 4181-2015甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法范围1本标准规定了甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定方法，本标准适用于甜菜种子、植株中甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定。基本信息2中文名称：甜菜叶斑病菌拉丁学名:Ramularia beticola Fautr.et Lambotte分类地位：真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota）座囊菌纲（Dothideomycetes），煤目（Capno-diales），球腔菌科（Mycosphaerellaceae），柱隔孢属（Ramularia）。传播途径：该病菌依靠风雨等近距离传播，以病株的组织尤其是叶片、种子远距离传播。该病菌的其他信息参见附录A。3方法原理甜菜叶斑病菌具有分生孢子梗和分生孢子，其在寄主上危害的症状及形态特征是鉴定该病菌的主要依据。: 仪器设备44.1仪器实体显微镜、生物显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、光照恒温培养箱、电子天平（1/1000）、冰箱、振荡器、离心机等。4.2实验用具三角瓶（250 mL、500 mL）、培养Ⅲ（9 cm）、烧杯、剪刀解剖针、解剖刀、滤纸、离心管、透明胶带、白瓷盘等。5现场检查检查种子中是否有可疑病粒（没有种衣剂的情况下)以及植物的病残体，并把可疑样品送到实验室做进一步鉴定。6实验室检验6.1非种衣剂种子检验6.1.1洗涤检验取50 g种子样品放人灭菌的三角瓶中,加人300 mL无菌水，在振荡器中震荡5 min～10 min,然后1 SN/T 4181—2015将震荡液在1500 r/min下离心5min，倒掉上清液留下1mL左右沉淀液，在显微镜下观察。6.1.2保湿培养将种子样品倒人灭菌磁盘中，检查病残体和可疑的病粒、癌粒，然后用灭菌的镊子在无菌的情况下将其放入已灭菌的、具三层滤纸的培养皿中（直径9cm）,加3mL的无菌水，每血约35粒,放人10个培养皿。将培养皿封闭在透明塑料袋中或用透明胶条封口，在16℃～20℃条件下光暗交替培养5d后用实体显微镜开始观察，也可肉眼观察，是否有真菌长出。将可疑病粒轻轻移放在另一个灭菌的培养皿中继续培养，3d后在显微镜下观察。6.2种衣剂种子检验将带有种衣剂的种子直接放入灭过菌的培养皿中，进行保湿培养（方法同6.1.2）。6.3植株检验6.3.1显微镜检查采集的病叶，如果病部有霉层，可直接用灭菌解剖针挑取霉层，或者用透明胶带直接粘取霉层后镜检，观察病菌形态特征。6.3.2保湿培养将病叶用无菌水冲洗3次后，在无菌条件下用灭菌解剖刀在病斑的病健交界处切取 4cm左右放人灭菌培养皿中,培养方法同6.1.2。长出菌后，用显微镜检查。7隔离种植检验种子经过实验室检疫后，必须进行田间隔离种植检疫，这是不可缺少的重要检疫手段。甜菜叶斑病一般可选择 6月份和7月份调查，甜菜褐斑病（Cercospora beticola）与甜菜叶斑病(Ramularia beticola)是甜菜叶片上最重要的两种病害，危害症状有些相近，但病原菌有明显的区别。可参见附录A和附录B根据所描述的症状，采集可疑病叶，带回实验室，检验方法同6.3。8病原菌形态鉴定特征菌丝无色有隔，分枝，分生孢子梗无色，常成簇从寄主气孔穿出，分生孢子梗短小不分枝，产孢梗项端曲膝状,分生孢子卵形、长椭圆形、至圆柱状，单胞或双胞，单细胞孢子（8 μm～12 μm）×（3 μm～4 μm）,双细胞孢子(15 μm～25μm)×（2 μm～4 μm）。参见图 A.2。9结果评定9.1种子检验如果在种子及其病残体中检查到与第8章中所描述的形态鉴定特征相致的病原菌，则判定为甜菜叶斑病菌。9.2．植株检验如果在病叶中观察到附录 A中相类似的症状，且检查到与第8章中所描述的形态鉴定特征相-致2 SN/T 4181—2015的病原菌，则判定为甜菜叶斑病菌。10结果记录记录样品信息及各项检测数据，包括样品来源、采集时间、地点、方法、结果等信息，并保存病原菌显微摄影、叶片症状等相关照片。11样品保存检出甜菜叶斑病菌的样品应保持在冷藏箱中；分离的甜菜叶斑病菌用PDA培养基培养保存，保存至少1 年，以备复核。保存期满后,须经灭菌处理