微生物检验(李鲁平).pptx

临床微生物学检验;临床标本的采集与处理 细菌形态学检查 细菌的分离培养与接种技术 细菌生化反应鉴定的理论基础 医院感染的实验诊断 抗菌药物敏感性试验 ;一、微生物检查基本方法;致病菌的检验程序;一、微生物检查基本方法与诊断技术 ;(二)? 细菌的人工培养及生化实验 1.细菌的人工培养法 ①培养基: 根据用途分基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、特殊培养基。根据物理性状分液体培养基、固体培养基、半固体培养基。 ②?细菌接种法: ③细菌培养法: 需氧培养; 厌氧培养; 二氧化碳培养; 微需氧培养。 ;2 .细菌生物化学实验方法、种类及原理 ①?糖分解产物实验 糖发酵试验; 葡萄糖代谢类型鉴别试验; 七叶苷水 解试验; 淀粉水解实验;甲基红试验; V-P试验;ONPG试验. ②?蛋白质分解产物试验 明胶液化试验; 吲哚试验;硫化氢试验; 尿素酶试验; 苯丙氨酸脱氨酶试验; 氨基酸脱羧酶试验. ③ 碳源利用试验 枸橼酸盐利用试验,丙二酸盐利用试验. ④呼吸酶类试验 氧化酶试验; 触酶试验; 硝酸盐还原试验. ⑤其他生化试验 脂酶试验; 磷酸酶试验; DNA试验; 凝固酶实验；胆汁溶菌试验 ;细菌L型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，普通营养基上不能生长，培养时必须用高渗的含血清的培养基。 细菌L型在高渗的含血清的培养基上生长后形成三种类型的菌落。; 二、微生物学检验概述 ;6) 脑脊液及其他：CSF应无菌操作进行腰椎穿刺；胸水、 腹水、包液、滑囊液等用注射器无菌操作采集。 7）眼,耳部标本： 用无菌拭子采集，及时接种相应培养基。 8) 性传播疾病标本：男性采取尿道脓性分泌物，女性 采取宫颈分泌物，供镜检及培养； 梅毒取皮肤渗出物和淋巴穿刺液 涂片；疱疹取疱内液体或刺破小疱后，用无菌拭子采样。 9) 创伤、组织、脓肿标本：根据不同部位采取不同标本。 ;标本运送 1）采集时间 应在疾病早期,急性期,症状典型或用药之前采集标本. 2）根据不同目的采用不同的采集方法. 3）除痰,大便,肛拭子等体外标本,其他标本采集时应用无 菌操作,采集量不得过少. 4）最好床边接种.(保温,冷藏,厌氧或种入运送培养基内). 5) 采集运???时必须注意安全,防止污染及交叉感染. ;（二） 微生物学检查; 3) 体外纯菌药物敏感性试验: 包括抑菌试验,杀菌试验, 联合药敏试 验和检测细菌产生的抗生素灭活酶等。 4)报告: 直接镜检要求2小时报告,说明标本合格,发现微生物情况和特点;初步鉴定和直接药敏结果于24小时或次晨报告,报告可能的病原菌和直接药敏结果;最后鉴定和细菌药敏结果一般不超过3天。 5. 血清学诊断: 是指用已知抗原或已知抗体检测患者血 清中相应抗体或抗原的方法。 血清学凝集试验：采用含有已知特异性抗体的血清与分 离培养出的未知纯种细菌或标本种的抗原进行血清学反 应,以确定病原菌的种或型。;临床微生物实验室安全措施和质量保证 ; 2.微生物实验室的室内质控 1)????? 对细菌检验人员的要求; 2)????? 操作手册; 3)????? 仪器设备的功能监测; 4)????? 培养基的质量控制; 5)????? 试剂,染色液以及抗血清的质量控制; 6)????? 标本检验的质量控制; 7)??? 标准菌株的来源和保存及室内质量 的全面控制. 微生物检验的室间质评 ;;二、临床常见的微生物及检验方法(例）; 一、球菌 ;?? ? 3) 分类方法：根据其在固体培养基上产生的不同色素分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。 1965年,国际葡萄球菌和微球菌分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性和阴性葡萄（CNS）。 CNS包括表葡、腐生葡萄球菌。凝固酶阳性葡萄球菌包括金葡、中间型和家畜葡萄球菌。 (二)??? 微生物检查 1.标本采集: 脓汁,渗出液,分泌物,血,尿,粪便,痰液及脑脊液。 2.检查方法及鉴定 ; 1)直接镜检 涂片,G染色镜检,如为阳性球菌呈葡萄状排列可初诊.初报 为找到G阳性葡萄状排列 球菌,疑为葡萄球菌。 2)分离培养 脓汁,尿液.脑脊液等离心沉淀,可直接接种血平板。37℃ 18—24h培养可产生不同色素的菌落.金黄色葡萄球菌在 周围有透明溶血环. 3)鉴定试验 a.触酶试验：细菌产生的过氧化氢酶催化双氧水生成水和 氧气,产生气泡. b.血浆凝固酶试验：血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产 生的一种与其致病力有关的侵袭性酶,分游离型和结合型。 其作用是血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和