质粒转化、细胞转染步骤.docx

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2023-08-07 发布于江苏
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质粒转化、细胞转染步骤.docx

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质粒转化、细胞转染步骤转化是指将外源DNA（常以质粒作为载体）导入受体细胞（如大肠杆菌），从而使其获得新的遗传特性。具体步骤如下：首先将12ul的质粒DNA加入50ul感受态cell中，轻柔混合后进行冰浴30min。接着向管中加入培养基，混匀后使细菌恢复正常生长状态。然后在42℃下热激90s，迅速冰浴2min，最后在37℃下震荡培养（﹤225rpm）1h，使细菌获得新的遗传特性。转染（transfection）是将含有目的基因的载体转移到真核细胞内的过程。在进行质粒转染时，需要先将6-well-plate中的每个孔培养至60-70%的状态。然后在接种时每个孔加入2.5×105个/ml的细