SNT 1113-2002进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白、叶绿素含量的测定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1113--2002进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白、叶绿素含量的测定方法Method for determination of phycocyanin andchlorophyiis in spirulina powder for import and export2002~05-20发布2002-11-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1113--2002前言本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国海南出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：张薇君、郝纯彦、李高兰、云昌浩。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1113-2002进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋自、叶绿素含量的测定方法1 范围本标准规定了进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白及叶绿素含量检验的抽样、制样和分光光度测定方法。本标准适用于进出口螺旋藻粉中藻蓝蛋白及叶绿素含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T16919食用螺旋藻粉3抽样和制样按GB/T16919规定的方法执行。4测定方法4.1 藻蓝蛋白含量测定4.1.1方法原理样品用磷酸盐缓冲液溶解，置冰箱中冷冻、融解，使色素蛋白析出，分离后的提取液用分光光度法测定。4.1.2 试剂磷酸盐缓冲溶液:将 0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液与 0.1 mol/L磷酸氢二钾溶液(45十55,V/V)混合，溶液pH值为7.0。4.1.3仪器设备分光光度计。超声波振荡器。离心机:3 000 r/min。低温冰箱：一20℃。离心管:50 mL。4.1.4样品测定称取试样0.25g～0.5g（精确至0.0001g），用缓冲液（4.1.2)溶解，超声振荡5min，定容于250mL容量瓶中，摇匀。将溶液全部转人250mL广口塑料瓶，置于一20℃冰箱内冷冻12h（或放置过夜），取出解冻，摇匀。取部分溶液于离心管中，在3000r /min转速下离心15min。取上层清液，1cm比色血，在分光光度计上分别测定620nm、652nm、562nm处的吸光度，用缓冲液（4.1.2)做空白。4.1.5结果计算根据下式(1)、式(2)、式(3)、式(4)计算出试样中藻蓝蛋白的质量分数含量。1 SN/T 1113—2002X 0. 187A620 - 0. 089A652(1)X2 - 0.196A652 -- 0. 041A620*(2)X3 - 0. 104As62 --- 0. 251X, - 0. 088X2.(3 )X, = (X+X+X)×V× 100.(4)m X 1 000式中:一测试液中藻蓝素的含量，单位为毫克每毫升(mg/mL）；Xi-X2-一测试液中异藻蓝素的含量,单位为毫克每毫升(mg/mL);X:-—一测试液中藻红素的含量,单位为毫克每毫升(mg/mL);A-——相应波长处(620 nm，652nm，562 nm)测得吸光值。X4-—试样中藻蓝蛋白的质量分数，单位为克每100克（g/100g），一样品定容体积,单位为毫升(mL）。V-试样质量，单位为克（g）。m测定结果取平行试验结果的算术平均值，保留小数点后第二位。平行试验允许误差(相对)不大于4%。注：整个操作过程须注意避光,分光光度测定应在 15 min 内完成。4.2叶绿素含量测定4.2.1方法原理以丙酮提取试样中的叶绿素，用乙醚分层，硫酸钠溶液洗涤净化，于642nm及660nm波长下比色法定量。4. 2.2 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。碳酸钙。石英砂：试剂级。 丙酮。无水硫酸钠：（650C灼烧4h）。 乙醚。 丙酮-水溶液(85+15,V/V)。4. 2.2.7硫酸钠水溶液：(2%,m/V）。4.2.3仪器设备。分光光度计。4. 2.3.2：玻璃研钵:100 mL。G：玻璃砂芯漏斗。分液漏斗：250mL。棕色容量瓶：50mL。移液管:10 mL、20 mL。4.2.4分析步骤提取称取试样约0.2g（精确到0.0001g）,置于100mL玻璃研钵中，加碳酸钙约0.2g及石英砂约0.5 g,小心研磨5 min,加人2mL丙酮-水溶液()继续研磨至干粉状;将研磨物全部转人G：玻!璃漏斗，缓缓抽滤，继续用丙酮-水溶液（)少量反复洗涤研钵并转移至漏斗内，至近无色，抽干；将漏斗内残渣重新倒回研钵中，加少量丙酮继续研磨1min，再转人漏斗中，抽滤，至滤液接近无色（约需30mL～35mL丙酮-水溶液）。2 SN/T 1113