NY_T 1819-2009饲料中胆碱的测定 离子色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1819-2009饲料中胆碱的测定离子色谱法Determination of choline in feedsIon chromatography2009-12-22 发布2010-02-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1819—2009前 言本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京）、北京英惠尔生物技术有限公司。本标准主要起草人：索德成、冯忠华、赵根龙、余东游、刘士杰、任泽林。ad5:-F NY/T 1819—2009饲料中胆碱的测定离子色谱法1 范围本标准规定了饲料中胆碱的离子色谱检测方法。本标准适用于配合饲料、添加剂预混合饲料、谷物籽实、饼粕和鱼粉中胆碱的测定。本标准定量限：添加剂预混合饲料为40mg/kg，配合饲料、谷物籽实、饼和鱼粉为80mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理用盐酸溶液水解或直接用水提取样品中的胆碱，用水稀释至合适的浓度后，使用阳离子交换柱和电导检测器分离测定。4试剂除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682中一级水。4.1甲磺酸：色谱纯。4.2盐酸。4.3盐酸溶液[C(HCI)=0.1mol/L]:取9mL盐酸于1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。4.4甲醇。4.5氯化胆碱标准品：纯度应大于95%。4.6氯化胆碱标准储备液：准确称取0.1g(精确至0.0001g)于105℃干燥恒重的氯化胆碱标准品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。该标准溶液的浓度为1mg/mL。2℃～8℃冷藏保存，有效期两个月。4.7氯化胆碱标准工作液：精密量取适量氯化胆碱标准储备液(4.5)置于一棕色容量瓶中，用水稀释成浓度为2 μg/mL、5μg/mL、10 μg/mL、20μg/mL、50 μg/mL、100μg/mL的氯化胆碱对照品工作液。2℃～8℃冷藏保存,有效期一个月。4.8流动相（4.5mmol/L甲磺酸水溶液）：称取2.88g甲磺酸（精确至0.01g)，用水定容至1000mL，该溶液浓度为30mmol/L。取150mL该溶液，用水定容至1000mL。5仪器和设备5.1离子色谱(IC)仪，带有电导检测器。1 NY/T 1819—20095.2天平：感量0.0001g。5.3离心机：转速大于5000r/min。5.4超声波提取器。5.5滤膜：0.45μm，水系。6采样和试样的制备6.1按GB/T14699.1采样。6.2选取有代表性饲料样品至少500g，按GB/T20195制备样品。7实验方法7.1提取7.1.1饲料、谷物籽实、饼粗和鱼粉中胆碱的提取称取试样2g(精确至0.01g)，置于100mL容量瓶中，加人10mL0.1mol/L盐酸溶液，混合后超声提取10min，于80℃提取2h，定容。5000r/min离心或过滤。移取上层清液，用水稀释使其浓度在2 μg/mL～100 μg/mL之间,过 0. 45 μm 滤膜,上机测定。7.1.2预混合饲料中胆碱的提取称取试样2g（精确至0.01g），置于100mL容量瓶中，加人80mL水，混合后置于振荡器上剧烈振荡或超声提取30min，静置10min，定容，离心或过滤，用水稀释使其浓度在2μg/mL～100μg/mL之间，过0.45um滤膜，上机测定。7.2测定7.2.1色谱条件色谱柱：阳离子交换分离柱(长250mm，内径4mm)或性能相当的其他分析柱。流速：1.0 mL/min。柱温：40℃进样量：25uL。检测器：电导检测器。7.2.2测定待IC分析仪基线平稳后，连续注入氯化胆碱标准溶液，直至得到峰面积能够重现的色谱峰。依次注人标准、试样溶液，以色谱峰的保留时间定性，面积积分值定量，用标准系列进行单点或多点校准。样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。8计算试样中胆碱的含量X，以毫克每千克(mg/kg)表示，按式(1)计算：X= CxV×1000 × 0. 868(1)m式中：由标准曲线查得的试样测定液中氯化胆碱的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；CV-稀释体积，单位为毫升(mL）；试料质量，单位为克（g）。m0.868一一氯化胆碱与胆碱之间的换算系数。平行测定结果用算术平均值