WST 53-1996尿中马尿酸、甲基马尿酸的高效液相色谱测定方法.pdf

中华人民共和国卫生行业标准尿中马尿酸、甲基马尿酸的高效液相色谱测定方法WS/T 53-1996Urine-Determination of hippuric acid and methylhippuricacid-High performance liquid chromatographic method1主题内容与适用范围本标准规定了尿中马尿酸、甲基马尿酸的高效液相色谱测定方法。本法最低检测浓度为马尿酸0.015mg/L，甲基马尿酸0.03mg/L。本标准适用于正常人和接触甲苯、二甲苯工人尿中马尿酸、甲基马尿酸的测定。2原理尿液经酸化后用乙酸乙酯萃取其中的马尿酸（HA)和甲基马尿酸（MHA），反相C1液相色谱柱分离，紫外检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。3仪器3.1高效液相色谱仪，紫外检测器。3.2离心机,3000 r/min。3.3恒温水浴锅。3.4旋涡混合器。3.5具塞离心管，10mL3.6具塞试管，5mL3.7微量取样器，10μL。3.8聚乙烯塑料瓶，100mL。3.9尿比重计。4试剂本标准所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂。4.1实验用水，蒸馏水或同等纯度的去离子水。4.2盐酸,P2o=1.19 g/mL。4.3冰乙酸,P2o=1. 05 g/mL。4.4氯化钠。4.5甲醇。4.6乙酸乙酯。4.7盐酸溶液，1+1。4.8马尿酸，色谱纯。中华人民共和国卫生部1996-10-14批准1997-05-01实施 WS/T 53-19964.9甲基马尿酸，色谱纯。4.10HA和MHA标准溶液：称取HA和MHA各50.00mg，加水溶解，移入50mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液1mL=1mgHA或MHA，4℃保存备用。4.11质控样加标的模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿。5采样、运输和保存用聚乙烯塑料瓶收集接触甲苯或二甲苯工人的班末尿，尽快测量比重，按0.1%（V/V)的比例加入盐酸（4.2），室温下运输。于4℃冰箱中可保存两周，也可将样品提取、蒸干，于常温保存。6分析步骤6.1仪器操作条件色谱柱：150mm，内径4.6mm，不锈钢柱。柱填料：C1s键合多孔硅胶，5μm；柱温：35℃。流动相：甲醇+水+冰乙酸=20+80+0.01；流速:1 mL/min。紫外检测器：波长254nm，灵敏度0.08AUFS。6.2样品处理6.2.1取1.0mL尿样于离心管中。6.2.2加入0.1mL盐酸溶液（4.7），0.3g氯化钠，4mL乙酸乙酯。于旋涡混合器上混合1min，以1000r/min速度离心5min。取0.4mL乙酸乙酯于具塞试管中，置于低于70℃水浴挥发至干。加1mL水溶解残留物。6.3标准曲线的绘制6.3.1取4支离心管，按下表配制标准管。HA和MHA标准管的配制0123管号0. 200.5000.10标准溶液（4.10)，mL0.800. 501. 00. 90水,mL00. 5 0. 10. 2HA含量,mg00. 20. 5 0. 1MHA 含量,mg6.3.2以下操作按6.2.2条进行。6.3.3取10uL溶解的残留物（6.3.2)注入色谱仪，按6.1条的仪器操作条件测定。以保留时间定性： WS/T 53--19961.020-1.000k=..(1)实测比重－1.0007.2按式(2)计算尿中HA或MHA的浓度。X = m X1 000 .·k...(2)V式中:X—尿中 HA 或 MHA 的浓度,mg/L;m—由标准曲线上查得的HA或 MHA 的含量，μg;V——进样体积,μL。8说明8.1本法的检测下限HA为0.015mg/L,MHA为0.03mg/L。精密度：当HA和MHA的浓度为0.1,0.2,0.5μg时HA的变异系数分别为1.5%,2.4%和1.1%。MHA的变异系数分别为1.5%，3.7%和1.7%。接触者尿加标平均回收率HA为99.05%，MHA为104.3%。8.2尿样中按0.1%（V/V）比例加入盐酸，也可以按0.1%（m/m）的比例加入百里酚，于4℃保存，至少可以稳定15天。尿样酸化，用乙酸乙酯提取，提取液蒸干保存，至少可以稳定半年。8.3质控样如用加标的模拟尿时可以考察准确度和精密度。用接触者尿和正常尿时可考察精密度。但人尿不易久存，模拟尿只含人尿中大量成分。附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由湖北省卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人：张国祥、梁禄。本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责解释。