SN_T 3040-2011化妆品中嗜麦芽寡食单胞菌检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3040—2011化妆品中嗜麦芽寡食单胞菌检测方法Detection of Stenotrophomonas maltophilia in cosmetics2012-04-01实施2011-09-09 发布中华人民共和国发布0国家质量监督检验检疫总局数码防伪） SN/T 3040--2011前言本标准按照GB1.12009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局、潍坊医学院本标准主要起草人：林黎明、刘云国、赵乃昕、雷质文、吴兴海。I SN/T 3040--2011化妆品中嗜麦芽寡食单胞菌检测方法.1范围本标准规定了化妆品中嗜麦芽寡食单胞菌的检验方法。本标准适用于各类化妆品中嗜麦芽寡食单胞菌的检验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T7918.1化妆品微生物标准检验方法总则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3. 1嗜麦芽寡食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia又名嗜麦芽寡养单胞菌。是一种严的非发酵型需氧苹兰氏阴性杆菌，是能引起感染的条件致病广泛分布于水、土壤、植物根系、人和动物的体表与消菌，与眼睛、泌尿器官、伤口和呼吸道的感染有关化道中。嗜麦芽寡食单胞菌在营琼脂上呈灰黄色、针尖状菌落，直径0.5mm～2mm，中央突起。设备和材料4吸管:2mL,分刻度 0.1 mI;10 ml分刻度 １mL4.1灭菌平Ⅲ：直径90mm，底都平整的玻璃或一次性塑料灭菌平Ⅲ4.2恒温培养箱：36℃±1℃、44℃4.34.4显微镜。4.5接种针、接种环(3mm）。4.6灭菌的样品处理器具：镊子、剪刀、勺子。4.7天平：量程0g～500g,精度0.1g。4.8高压灭菌器。4.9²灭菌小试管：15mm×50mm。4.10可调移液器:10 μL～100 μL,100 μL～1 000 μL。4.11均质器。5 培养基和试剂5.1SCDLP液体培养基:见 A.1。5.2嗜麦芽寡食单胞菌选择性增菌肉汤(SMSEB)基：见 A.2。 SN/T 3040—20115.3Mueller-Hinton 培养基:见 A.3。5.4　嗜麦芽寡食单胞菌选择性分离培养基(SMSIM)：见 A.4。5.5无机盐基础培养基(MBM)：见 A.5。5.6 MBMi、MBM2²、MBM;培养基:见 A.6。5.7 液体石蜡。5.8吐温-80。5.9生理盐水。6检验程序6.1方法原理嗜麦芽寡食单胞菌中95%以上的菌株需要含硫氨基酸作为生长因子才能生长，以乳酸盐为唯一的碳源并产生碱性反应，在只含有乳酸盐的无机盐培养基（MBM)中不能生长，在加有微量酵母膏的MBM中该菌分解麦芽糖产酸，利用这些生理生化特性建立本方法中所用的生化鉴定方法。6.2检验程序嗜麦芽寡食单胞菌的检验程序见图1。样品10g(10mL)制成1:10稀释液10mL稀释液加入90 mL SCDLP增菌液36℃±1℃ 24h±2110mL稀释液加入100mL SMSEB增菌液36 ℃±1℃ 24 h±2 h Mueller-HintonSMSIM36℃±1℃24 h~48 h挑选可疑菌落接种至MBM1、MBM2、MBMs培养基进行生化鉴定报告结果图1嗜麦芽寡食单胞菌检验程序示意图检验步骤7. 1样品制备7.1.1 总体要求参照GB/T 7918.1进行制样。2 SN/T 3040—20117.1.2液体样品水溶性液体样品，可量取10mL加到90mL灭菌生理盐水中，如样品少于10ml.仍按10倍稀释法进行。如为5mL则加45mL灭菌生理盐水，混匀后，制成1：10稀释液。油性液体，取样品 10 mI，先加 5mL灭菌液体石蜡混匀，再加10 mL灭菌的吐温-80,在40℃～44℃水域中振荡混合10min，加人灭菌的生理盐水75mL（在40℃～44℃水浴中预温），在40℃～44℃水浴中乳化，制成1：10的悬液。7.1.3膏、霜、乳剂半固体状样品亲水性的样品，称取10g,加到灭菌的带玻璃珠加有 90 mL灭菌生理盐水的锥形瓶中，充分振荡混勾，放32℃水浴静置15min，用其上清液作为1：10的稀释液。疏水性的样品，称取10g，放到灭菌的研钵中，加10mL灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10mL灭菌的吐温-80,研磨待溶解后，加70mL灭菌生理盐水，在40℃～44℃水浴中充分混合，制成1：10稀释液。7.1.4　固体样品称取10g，加到灭菌的生理盐水稀释瓶中，振摇混匀，使其分散混悬后，放30℃～32℃水浴中，15min后取出，充分振荡混合，再放到30℃