SCT 7201.4-2006鱼类细菌病检疫技术规程 第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法.pdf

ICS65.020.30B41SC中华人民共和国水产行业标准SC/T7201.4—2006鱼类细菌病检疫技术规程第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法Rules for quarantining bacterial diseases of fishPart 4:Diagnostic methodfor Red-skin disease2007-02-01实施2006-12-06发布中华人民共和国农业部发布 SC/T 7201.4--2006前 言SC/T7201《鱼类细菌病检疫技术规程》分为五个部分：-第1部分：通用技术；-第2部分：柱状嗜纤维菌烂鳃病诊断方法；第3部分：嗜水气单胞菌及豚鼠气单胞菌肠炎病诊断方法；一第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法；第5部分：白皮假单胞菌白皮病诊断方法。本部分为SC/T7201的第4部分。本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院长江水产研究所、中国水产科学研究院珠江水产研究所。本部分主要起草人：何力、邹为民、徐忠法、姜兰、周瑞琼、罗晓松。33 SC/T7201.4—2006鱼类细菌病检疫技术规程第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法1范围本部分规定了鱼类荧光假单胞菌赤皮病（red一skindisease)的诊断方法。本部分适用于鱼类赤皮病的诊断。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。SC/T7014—2006水生动物检疫实验技术规范SC/T7201.1一2006鱼类细菌性病检疫技术规范第1部分：通用技术3病原体与流行情况3.1主要病原体荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）。3.2流行情况草鱼、青鱼、鲤、鲫、团头鲂等多种淡水鱼均可患此病。全国各地，一年四季都有流行，尤其是在捕捞、运输或北方越冬后，造成鱼体受伤，最易暴发流行。4试剂除非另有说明，在检验中仅使用确认为分析纯的试剂、蒸馏水或去离子水。常用试剂见SC/T7201.1—2006的3.1；试剂与染色液的配制应符合SC/T7201.1-2006中附录A的规定。4.1发酵试剂管（甘露糖、山梨醇、阿拉伯糖、葡萄糖、海藻糖、肌醇）。5培养基5.1普通营养琼脂培养基5.2蛋白陈葡萄糖磷酸盐培养液5.3硝酸盐液体培养基5.1、5.2和5.3培养基的配制见SC/T7201.12006中附录B。6设备和器械应符合SC/T7201.1一2006第4章的规定。7采样应符合SC/T7014—2006第4章的规定。35 SC/T 7201.4-20068诊断8.1临床诊断8.1.1活动情况病鱼行动迟缓，离群独游。8.1.2外部检查体表出血发炎，鳞片脱落，尤其是鱼体两侧及腹部最为明显；鳍条的基部或整个鳍条充血，鳍的末稍端腐烂，常烂去一段，鳍条间的软组织也常被破坏，使鳍条呈扫帚状，在体表病灶处常继发水霉感染；部分鱼的上、下颌及鳃盖也充血发炎，鳃盖内表面的皮肤常被腐蚀成一圆形或不规则形的透明小窗，显示与细菌性烂鳃病的复合感染。8.2实验室诊断8.2.1样品处理用刀片刮除病灶腐烂部分后用接种环挂取病料，在普通营养琼脂培养基上平板划线，25℃～30℃培养24 h。8.2.2菌落形态培养基上菌落圆形，边缘整齐，呈灰白色，半透明，20h开始产生绿色或黄绿色的色素，弥漫培养基。8.2.3革兰氏染色在于净载玻片上滴加一滴蒸馏水；取菌落少许与蒸馏水混合并均匀涂布，自然干燥，火焰固定；加草酸铵结晶紫染液染1min~2min，加水冲洗；加革兰氏染色用碘液作用1min~2min，加水冲洗；加复红酒精染液染50s～60s，加水冲洗。干燥镜检。被染成紫蓝色为阳性。荧光假单胞菌为阴性。8.2.4生化检验8.2.4.1甲基红和V.P试验用接种环挑取单个菌落少许，接种于蛋白陈葡萄糖磷酸盐培养液，置37℃培养24h后，分别取2ml培养液于两只小管中。前者加甲基红试剂2滴轻摇后观察，出现红色为阳性。后者加入6%α-萘酚酒精溶液1mL，再加人40%氢氧化钾溶液0.4mL，充分振荡，室温下静置5min-30min后观察，呈红色反应为阳性。荧光假单胞菌均为阴性。8.2.4.2.发酵试验用接种环或接种针挑取单个菌落少许，分别接种甘露糖、山梨醇、右旋阿拉伯糖、葡萄糖、海藻糖、肌醇等6种发酵试验管。28℃培养24h。凡试验管颜色从紫色变为黄色，表明细菌可发酵该种糖类，判定为阳性。荧光假单胞菌可发酵以上6种糖类。8.2.4.3氧化酶试验将少许菌落涂布于浸有1%盐酸四甲基对苯胺的滤纸上。10s内观察