NYT 1618-2008鹿茸中氨基酸的测定 氨基酸自动分析仪法.pdf

ICS 65.020.30B 44NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1618—2008鹿茸中氨基酸的测定氨基酸自动分析仪法Determination of amino acids in velvet antlerby amino acid analyzer2008-05-16发布2008-07-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/ T 1618—2008前言本标准的附录 A 为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部参茸产品质量监督检验测试中心。本标准参加起草单位：吉林省农业科学院大豆研究所。本标准主要起草人：陈丹、李月茹、王艳梅、初丽伟、尚梅、王艳红、张明。T NY/T 1618—2008麗茸中氨基酸的测定氨基酸自动分析仪法1 范围本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定鹿茸中氨基酸的常规酸水解法和氧化酸水解法。本标准适用于鹿茸(包括茸片、茸粉)中氨基酸的测定。常规酸水解法适用于测定天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的含量。氧化酸水解法适用于测定胱氨酸、蛋氨酸的含量。2规范性引用文件下列标准包含的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理常规酸水解法使鹿茸蛋白在110℃、c（HCI）=6 mol/L盐酸作用下，水解生成游离氨基酸，经离子交换色谱法分离后，与三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计测定非含硫氨基酸：天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸的含量。含硫氨基酸需用氧化酸水解法进行测定。氧化酸水解法将鹿茸中的含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)用过甲酸氧化并经盐酸水解生成磺基丙氨酸和蛋氨酸砜，然后用离子交换色谱法分离测定。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，实验用水应符合GB/T6682。4.1常规酸水解法4.1.1盐酸：优级纯。4. 1.2酸解剂:盐酸溶液 c(HCl)=6mol/L,将盐酸(见本标准 4.1.1)与去离子水等体积混合，然后在每百毫升此溶液中加人0.1g的苯酚4.1.3冷冻剂:市售食盐与冰按1：3混合。4.1.4稀释上机样品用的柠檬酸缓冲液，pH 2.2,c(Na+）=0.2mol/L：称取柠檬酸三钠19.6g，用水溶解后加人盐酸16.5mL，硫二甘醇5.0mL,苯酚1g,加去离子水稀释到1000mL，摇匀，用G4玻璃砂芯漏斗过滤，备用。4.1.5不同pH和离子强度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液：按氨基酸自动分析仪的说明书配制。4.1.6三酮溶液：按氨基酸自动分析仪的说明书配制。4.1.7氨基酸混合标准储备液:含 L-天门冬氨酸、L-苏氨酸等 17种常规蛋白水解液分析用层析纯氨基酸,各组分浓度 c(氨基酸)=2.50(或 2.00)mmol/L。4.1.8混合氨基酸标准工作溶液：吸取一定量的氨基酸混合标准储备液（见本标准4.1.7)置于50mL容量瓶中，用稀释上机用柠檬酸缓冲液（见本标准4.1.4)定容，混匀，使各氨基酸组分浓度c(氨基酸）100 μmol/L.1 NY/T 1618-—20084.2氧化酸水解法4.2.1过甲酸溶液：将30%过氧化氢(GB/T 6684)与88%甲酸(HG3-1296)按1：9(V/V)混合，于室温下放置1h，置冰水浴中冷却30 min,临用前配制。4.2.2氧化终止剂：48%氢溴酸(GB621）。4.2.3酸解剂：盐酸溶液 c(HCl)=6 mol/L，将盐酸与去离子水等体积混合。4.2.4稀释上机样品用的柠檬酸缓冲液，pH 2.2,c(Na+）=0.2mol/L：称取柠檬酸三钠19.6g，用去离子水溶解后加人盐酸 16.5mL,硫二甘醇 5.0mL,苯酚 1g,加去离子水稀释到1000mL,摇匀,用 Ga玻璃砂芯漏斗过滤，备用。4.2.5不同pH和离子强度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液：按氨基酸自动分析仪的说明书配制。4.2.6三酮溶液：按氨基酸自动分析仪的说明书配制。4.2.7磺基丙氨酸蛋氨酸砜标准储备液,2.50mmol/L：准确称取磺基丙氨酸105.7mg和蛋氨酸砜113.3mg,加去离子水溶解并定容至250mL。4.2.8氨基酸混合标准储备液：含L~天门冬氨酸、L-苏氨酸等17种常规蛋白水解液分析用层析纯氨基酸，各组分浓度 c(氨基酸)=2.50 mm