SN 1487-2004输入性啮齿类动物携带钩端螺旋体的检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T入性啮齿动物携带钩端螺旋体的检测方法Detecting methods for leptospira in imported rodents2004-11-17 发布2005-04-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准输入性啮齿动物携带钩端螺旋体的检测方法SN/T 1487—2004中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印尉厂印刷*开本880×12301/16　印张0.75　字数 16字2005年2月第～版　2005年2月第一次印刷 SN/T 1487—2004前言本标准的附录 A、附录 B、附录 C均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、中华人民共和国陕西出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：郑剑宁、叶仲华、杨定波、裘炯良、李禾、闫护森、施惠祥、卢岳云。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1487-2004输入性啮齿动物携带钩端螺旋体的检测方法1范围本标准规定了对国境口岸输人性啮齿动物携带钩端螺旋体的检测对象、生物安全要求、样品采集与处理、检测方法、结果的报告、阳性结果处置。本标准适用于检验检疫机构对输入性啮齿动物携带钩端螺旋体的检测，对口岸发现的啮齿动物检测钩端螺旋体也可参考。2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1啮齿动物rodent哺乳纲中种类最多，分布最广的一类动物，包括啮齿目和兔形目。没有犬齿，门齿与前白间有空隙，以食植物为主。2.2输入性啮齿动物imported rodent通过人境交通工具、集装箱、货物、行李及邮包携带入境的啮齿动物。2.3螺旋体 microbes spirllum一类革兰氏阴性的原核细胞微生物,形态细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能进行活泼的螺旋状运动。2. 4钩端螺旋体leptospira,一般为6 μm～20 μm,宽0.1 μm～0.2 μm,具有细简称钩体，螺旋体的一属。菌体纤细，长短不，密而规则的螺旋，菌体一端或两端弯曲呈钩状，常为“C”、“S”等形状。可分为致病性钩体及非致病性钩体两大类。3检测对象在人境交通工具、集装箱、货物、行李及邮包中发现的啮齿动物。4生物安全要求4.1操作时应做好个人防护及被啮齿动物咬伤。4.2操作过程中应防止啮齿动物逃跑。4.3样品采集必须在强毒实验室或P2实验室中进行。5样品采集和处理5.1采血方法选择根据输人性啮齿动物体形大小、采血数量、质量及操作的难易程度，选择采血方法，见表1。 SN/T 1487—2004表 采血方法采血量/mL采血方法溶血操作啮齿动物大(体重≥50 g)小(体重50 g)易眼眶后静脉丛0.3~0. 60.1 ~0.3较名大、小眼眶易0.5~1. 00.2~0.3较多大小颈静脉或颈动脉4. 0 ~8. 0较易大较少断头0.8~1.2较少易小左前肢腋窝下1. 0~4. 00. 3~0. 5一般较易大、小心脏4. 0~8. 00. 6~1. 0较少较难大、小腹主动脉8.0~10.0少较易大股静脉或股动脉0.4~0.6一般较易大尾尖1. 0~~3. 0较多0. 4 ~0. 6较难大、小5. 2操作方法见附录 A。5.3样品处理将采得的血液经离心处理后，吸取上清液，作为实验所需的血清。6检测方法6.1直接镜检6.1.1主要器材实体显微镜、高速离心机。6.1.2检测方法直接暗视野检查法取啮齿动物血液-滴，加纯化水一滴，使血细胞溶解，在暗视野显微镜下检查钩端螺旋体的活动情况。6. 1.2.2离心暗视野检查法取啮齿动物静脉血约 1mL于无菌试管中待凝固。1000 r/min离心10 min 后,吸取血清与血细胞交界处略显白色的悬液。涂片后暗视野显微镜检查钩端螺旋体的活动情况。差速离心暗视野检查法采集啮齿动物静脉血1mL,加于含2mL8%构橡酸钠溶液的试管中。1000r/min离心10 min,吸上层血浆置另一清洁管中，3000r/min～3500 r/min离心30 min～60min。取沉淀物一滴于玻片上，暗视野显微镜检查钩端螺旋体的活动情况。6.1.3结果判定-在暗视野显微镜下检查有活动的钩端螺旋体，判定为阳性。--. -6.2显微镜凝集实验见附录 B。6.3酶联免疫吸附试验见附录 C。2 SN/T 1487--20047检测结果报告7.1根据直接镜检法检测结果，有活动的钩端螺旋体时，报告为“检出钩端螺旋体（直接暗视野检查法/离心暗视野检查法/差速离心暗视野检查法)”；无活动的钩端螺旋体时，