SNT 2497.9-2010进出口危险化学品安全试验方法 第9部分：血清溶血素测定试验.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.9-2010进出口危险化学品安全试验方法第9部分：血清溶血素测定试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 9 : Determination of serum hemolysin2010-09~16 实施2010-03-02 发布03中华人民共和国#810031发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 2497.9--2010前言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：-第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验;第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型泽繁殖试验；-一第 4 部分:酿酒酵母有丝分裂重组试验;第5部分：睾丸细胞UDS试验；一第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；-第8部分：胭窝淋巴结试验；第9部分:血清溶血素测定试验;一第10 部分;T淋巴细胞增殖功能测定试验;第11部分：种系突变试验;-第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；-一第15部分：PCR-SSCP实验；--第16 部分：Western-Blot 实验；-第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；一一第18部分：DNA加合物的检测方法；一第 19 部分:Northern Blot 实验；第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；-第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；一第22部分:DNA的 Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；一第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；一第26部分：巨噬细胞功能试验；-第27部分：流式细胞术检测凋亡；一第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量（BOD)测定。本部分为SN/T2497的第9部分。本部分修改采用《毒理学实验方法与技术》中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按GB/T1.1一2000 做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张园、王利兵、王华、赵琢、于智睿、熊中强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。T SN/T 2497.9--2010进出口危险化学品安全试验方法第9部分：血清溶血素测定试验1范围SN/T 2497的本部分规定了血清溶血素测定试验的术语和定义、试验原理、试验方法和试验结果。本部分适用于半数溶血值测定法检测进出口危险化学品对绵羊红细胞所致小鼠溶血素生成的影响。2规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。配合饲料通用质量标准GB14924.1实验动物GB14925实验动物环境及设施3术语、定义和缩略语3.1 术语和定义下列术语和定义适用于本部3. 1. 1溶血素hemolysin经绵羊红细胞免疫动物后产生的抗体3.2缩略语下列缩略语适用于本部分3.2.1SRBC绵羊红细胞 sheep red blood cell.4试验原理用绵羊红细胞(SRBC)免疫小鼠，然后将免疫活性细胞（小鼠脾脏 B淋巴细胞）、SRBC 和补体在液相介质中进行反应。SRBC与抗体形成细胞所产生的IgM结合形成抗原抗体复合物，激活补体系统，裂解 SRBC而释放出血红蛋白，以分光光度计定量测定。所测值反映了抗体形成细胞产生抗体的功能。5试验方法5.1试验动物小鼠，体重18g～25g。试验动物饲养条件应符合GB14924.1和GB14925有关规定5.2主要试剂和材料5.2.1SRBC的制备脱纤维防凝处理的 SRBC,以NS洗涤2次，每次2000r/min离心5 min。弃上清液，制成 SRBC悬1 SN/T 2497.9—2010液，然后用血细胞计数板计数细胞，最后稀释成 SRBC溶液1.5×10°/mL。5.2.2免疫小鼠脾细胞的制备取上述稀释的 SRBC,经尾静脉或腹腔内注射免疫小鼠（鼠龄8 周～10 周）,每只 0.2 mL。4 d后拉颈处死,取出脾脏用含 5%小牛血清的Hanks液清洗，去除脂肪和结缔组织。在 200 目铜网上研磨，制备单个脾细胞悬液,取滤液至试管内。加人含 5%小牛血清的冷·Hanks 液，2 000 r/min离心5min，弃上清液