NY_T 2004-2011大豆及制品中磷脂组分和含量的测定高效液相色谱法.pdf

ICS 67.200.10B 21NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2004—2011大豆及制品中磷脂组分和含量的测定高效液相色谱法Determination of phospholipids in soybean and soybean products--HPLC2011~12-01实施2011-09-01发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 2004—2011前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部农产品加工局提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：李培武、张文、王秀嫔、汪雪芳、丁小霞、周海燕、谢立华。 NY/T 2004—2011大豆及制品中磷脂组分和含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了高效液相色谱法测定大豆及制品中磷脂组分和含量的方法。本标准适用于大豆及制品（豆腐、豆浆、腐乳等）中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定。本标准磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇线性范围分别为50ug/mL～4000μg/mL、100μg/mL~4000μg/mL、150μg/mL~4000μg/mL。本标准磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇检出限分别为：10μg/mL、30μg/mL、50μg/mL。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中的磷脂用氯仿一甲醇混合液提取，经氨基硅胶固相萃取柱纯化后，高效液相色谱分离，外标法定量。4试剂除非另有说明，均使用分析纯试剂和GB/T6682规定的一级水。4.1氯仿（CHCl3）。4.2 乙酸(CH:COOH)。4.3乙醚(CH:CH2OCHzCHs)。4.4甲醇(CH:OH)，色谱纯。4.5正已烷(CHsCH²CH²CHzCHzCH3），色谱纯。4.6异丙醇（CH:CHOHCHs），色谱纯。4.7氯仿-甲醇混合溶液(2十1)：取氯仿（4.1)和甲醇(4.4)混合。4.8氯化钠溶液（14.6g/L)：称取14.6g氯化钠(NaCI)加水溶解定容到1000mL。4.9氯化钙溶液（1.0g/L）：称取1.0g无水氯化钙(CaCl2)加水溶解定容到1000mL。4.10生理盐水（1十1）：取氯化钠溶液（4.8)50mL和氯化钙溶液（4.9)50mL混合。4.11氯仿一异丙醇混合溶液(2十1)：取氯仿（4.1)40mL和异丙醇（4.6)20mL混合。4.12乙酸一乙醚混合溶液（2+144）：取乙酸（4.2)2mL和乙醚（4.3）144mL混合。4.13正已烷一异丙醇混合溶液（1十1）：取正已烷（4.5)50mL和异丙醇（4.6)50mL混合。4.14磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇标准品：纯度95%。4.15磷脂标准储备溶液1 NY/T 2004—2011分别称取磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇50mg（精确至0.1mg），溶解在5.0mL的正已烷一异丙醇混合溶液（4.13）中得到磷脂酰胆碱质量浓度约为10mg/mL、磷脂酰乙醇胺质量浓度约为10mg/mL和磷脂酰肌醇质量浓度约为10mg/mL的标准储备溶液。该标准储备溶液在4℃下，可以稳定储藏3个月。4.16磷脂标准工作溶液分别取上述不同体积磷脂标准储备溶液，分别用正已烷一异丙醇混合溶液（4.13)稀释，获得不同浓度的磷脂工作标准溶液，其中磷脂酰胆碱的工作标准溶液质量浓度为50μg/mL、250μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL和4000μg/mL；磷脂酰乙醇胺的工作标准溶液质量浓度为100μg/mL、250μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL和4000μg/mL；磷脂酰肌醇的工作标准溶液质量浓度为150μg/mL、250μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL和4000μg/mL。5仪器设备5.1液相色谱仪，配有紫外检测器，硅胶正相色谱柱。5.2分析天平：感量0.01mg和感量0.1mg。5.3真空旋转蒸发仪。5.4超声波提取仪。5.5离心机。5.6氮吹仪。5.7氨基固相萃取柱：6mL,1000mg。5.8粉碎机、机械磨或咖啡磨等。5.9具塞离心管，50mL和100mL。5.10中速定量滤纸。6试样制备试样按GB5491进行扦取和分样，粉碎后装入样品瓶备用。7分析步骤7.1提取7.1.1固体试样：称取5g(精确至0.1mg)固体试样于50mL具塞离心管(5.9)，加入30mL氯仿一甲醇混合溶液（4.7)混匀，30℃超声波提取30min，滤纸（5.10)过