SNT 2063-2008进出口蜂王浆中氯霉素残留量的检测方法 液相色谱串联质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2063-2008进出口蜂王浆中氯霉素残留量的检测方法液相色谱串联质谱法Determination of chloramphenicol residue in royaljelly for import and export-LC-MS/MS2008-11-01实施2008-04-29发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2063—2008前言本标准的附录 A和附录 B均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：谢文、丁慧瑛、钱艳、奚君阳、陈笑梅、黄雷芳。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2063--2008进出口蜂王浆中氯霉素残留量的检测方法液相色谱串联质谱法范围本标准规定了蜂王浆中氯霉素残留量的制样和液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于蜂王浆中氯霉素残留量的检测2　方法提要样品用甲醇沉淀蛋白质，再用乙酸乙酯提取，经硅胶和.Oasis.HLB固相萃取小柱净化，液相色谱串联质谱测定和确证，同位素内标法定量。3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。3.1乙酸乙酯:高效液相色谱级。3.2甲醇：高效液相色谱级。3.3甲苯：高效液相色谱级。3.4氯化钠。3.5无水硫酸钠：650℃灼烧4h,在干燥器内冷却至室温,贮于密封瓶中备用。3.6甲醇水溶液：甲醇-水(2十8,体积比）3.7甲苯-乙腈（9十1，体积比）。3.8甲苯-乙腈（4十6,体积比）。3.9氯霉素标准品（chloramphenicol,CAS NQ.56-75-7,C11 H1ClzN2Os）:纯度大于等于 99%。3.10氯霉素-d5标准品：纯度大于等于 99%。3.11氯霉素标准储备溶液：称取适量标准品（3.9）,用甲醇溶解，溶液浓度为100μg/mL。1℃～4℃冷藏保存。有效期6个月。3.12氯霉素-d5标准储备溶液：称取适量标准品（3.10），串甲醇溶解，溶液浓度为100μg/mL，1℃～4℃冷藏保存。有效期6个月。3.13标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成0.04 ng/mL、0.12 ng/mL、0.24ng/mL、0.32ng/ml、0.64 ng/mL的标准工作溶液，相当于样品中含有0.1 μg/kg、0.3μg/kg、0.6 μg/kg、0.8 μg/kg、1.6 μg/kg 氯霉素，同位素内标氯霉素-d5浓度均为0.25 ng/ml。3.14无水硫酸钠柱：80mm×40mm（内径)筒形漏斗，底部垫5mm脱脂棉，再装40mm无水硫酸钠。3.15硅胶固相萃取柱：500mg或相当者，使用前用10mL甲苯-乙睛（9十1，体积比）预洗Oasis HLB固相萃取柱：500 mg,或相当者，使用前用甲醇 7mL 和水 10 mL 预洗。3.164仪器和设备4.1高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。4.2旋转蒸发器。4.3旋涡混合器。 SN/T 2063--20084.4固相萃取装置。4.5高速离心机:7 000 r/min。4.6氮吹仪。5试样制备与保存取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装人样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在一18℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。6测定步骤6.1　提取称取 4g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞离心管中，准确加人0.5mL氯霉素-d5（5ng/mL)内标溶液和15ml水，混匀，静置5min，加甲醇至30.0mL，于旋涡混合器上以2000r/min，混匀1min，以6000r/min离心5min，移取15.0mL上层液置于另一个50mL具塞离心管中，加人2g氯化钠和 20 mL乙酸乙酯，于旋涡混合器上以 2000 r/min，混匀 1 min，以 4 000 r/min 离心5 min,将上层乙酸乙酯过无水硫酸钠柱（3.14)收集于浓缩瓶中，再加人20mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取液,再用5mL乙酸乙酯洗涤无水硫酸钠柱,在40℃以下水浴减压浓缩至近干。6.2　净化用10mL乙睛-甲苯（1十9，体积比）溶液溶解残渣，将溶解液分次转移至硅胶净化柱（3.15)中，弃去流出液，用6mL乙腈-甲苯(6十4,体积比)洗脱，在50℃以下水浴下平缓氮气吹干，加人5mL水溶解残渣，将溶液转移至Oasis HLB柱（3.16)中，再用10mL水和5mL甲醇水溶液（3.6)依次洗涤离心管，洗涤液过固相萃取小柱,弃去流出液。在负压下减压抽干,最后用 5 mL甲醇洗脱,控制流速 1 mL/min～2mL/min，