NY_T 3292-2018蔬菜中甲醛含量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.080.20B 31NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3292—2018蔬菜中甲醛含量的测定高效液相色谱法Determination of formaldehyde in vegetables by high performance-Liquid chromatography2018-12-01实施2018-07-27 发布中华人民共和国农业农村部‧发布 NY/T 3292—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：张树秋、钱永忠、邓立刚、郑床木、谷晓红、赵善仓、李增梅、苑学霞、聂燕、王玉涛。I NY/T 3292—2018高效液相色谱法蔬菜中甲醛含量的测定1范围本标准规定了蔬菜中甲醛含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于蔬菜中甲醛含量的测定。本方法定量限为2.0mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试料中的甲醛经水提取，在酸性条件下与衍生剂2,4-二硝基苯肼反应生成2，4-二硝基苯踪，用二氯甲烷萃取、浓缩后，注入高效液相色谱仪，355nm波长处测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯。水应符合GB/T6682中一级水的要求，且使用前煮沸30min后盖塞冷却。注：实验所涉及的玻璃器皿均需120℃加热处理，塑料管先用乙醇冲洗、50℃加热处理后使用。4.1乙腈(CH;CN)：色谱纯。4.2二氯甲烷(CHzCl2）：色谱纯。4.3邻苯二甲酸氢钾溶液(0.01mol/L)：称取2.04g邻苯二甲酸氢钾，用水溶解并定容至1000mL。4.42,4-二硝基苯肼(DNPH):纯度≥99.0%。4.52,4-二硝基苯肼溶液（0.4g/L)：称取（4.4)2,4-二硝基苯肼0.040g，加人乙腈溶解，并定容至100 mL.4.6甲醛标准溶液（100μg/mL）：冷藏避光条件下保存。4.7微孔滤膜：孔径0.22um，有机相。5仪器设备5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2分析天平：感量士0.0001g和士0.01g。5.3超声波清洗器。5.4旋转蒸发仪。5.5涡旋振荡器。5.6聚四氟乙烯离心管：50mL。5.7恒温培养箱，（50土2)℃。5.8组织捣碎机。1 NY/T 3292—20186试样制备蔬菜样品取可食部分，采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机捣碎成匀浆。取200g匀浆放人聚乙烯瓶中于一20℃～一16℃条件下保存。称取试样时，常温试样应搅拌均匀；冷冻试样应先解冻再混匀。7分析步骤7.1提取称取约5g试样，精确至0.01g，置于50mL容量瓶中，加人40mL水，超声提取30min后取出，冷却，加水至刻度，摇匀，用滤纸过滤，弃去初滤液，取续滤液备用。7.2衍生移取5mL滤液（7.1)置于50mL具塞离心管中，依次加人10mL邻苯二甲酸氢钾溶液（4.3）和5mLDNPH衍生液（4.5），涡旋振荡混匀，50℃士5℃恒温培养箱反应60min，取出冷却至室温。7.3萃取净化将衍生反应液（7.2)转移至150mL分液漏斗中，加人20mL二氯甲烷，振荡萃取，静置分层后收集下层有机相，再加入15mL二氯甲烷，重复提取2次，合并3次有机相于150mL圆底烧瓶中，40℃旋转蒸发至约2mL，转移至5mL容量瓶中，用少量乙睛洗涤圆底烧瓶，合并到5mL容量瓶中并定容，混匀后过微孔滤膜（4.7），滤液供HPLC测定。注：萃取液在旋转蒸发浓缩时，不得全部蒸干。7.4标准曲线的制备分别移取5μL、10μL、25μL、50μL、100μL甲醛标准储备液（4.6)（相当于0.5μg、1.0μg、2.5μg、5.0μg、10.0μg)各置于50mL具塞离心管中，加人5mL水，其他步骤同7.2～7.3，得到甲醛的浓度分别为0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L系列标准溶液。分别注人高效液相色谱仪中，以测定相应的峰面积为纵坐标，以标准工作液浓度为横坐标绘制标准曲线。8测定8.1色谱参考条件a)色谱柱：C18不锈钢柱（250mm×4.6mm，粒径5μm），或相当者；b）流动相：乙腈-水（50+50,V/V)；c)流速:1.0mL/min;d）检测波长：355nm;e）:进样量：10μL；f）柱温:40℃。8.2色谱测定方法将甲醛标准衍生溶液和样品待测液注人