SN 1358.1-2004马传染性贫血补体结合试验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1358. 1-2004马传染性贫血补体结合试验方法Protocol of complement fixation test for equine infectious anaemia2004-06-01发布2004-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局，数码防伤 SN/T 1358.1—2004前言本标准的附录 A为规范性附录,附录 B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王浩、柳炳兰、巫剑平、曲贵威。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1358.1—2004马传染性贫血补体结合试验方法范围本标准规定了马传染性贫血补体结合试验方法。本标准适用于马传染性贫血抗体水平的检测。2仪器设备2.1 培养箱。2.2 冰箱。2.3恒温水浴箱。2.4 离心机,离心管。2.5 天平(感量0.1 g)。2.6平皿:规格 90 mmX15 mm。2.7 三角烧瓶(50 mL～250 mL)。2.8²试管、试管架：规格12× 37mm、10×100 mm。2.9 吸管:规格 1 mL、5 mL、10 mL。2.10200 μL可调微量移液器和吸头。3 材料3.1试剂：氯化钠、氯化钙、氯化镁、葡萄糖、枸橡酸钠、巴比妥钠、巴比妥、明胶均为分析纯。3.2 溶液的配制:见附录 A。3.3抗原：检测用标准抗原应用同批号的两种抗原，即V抗原(接毒抗原）、C抗原（对照抗原）。3.4标准阳性血清及阴性血清：由出售抗原的药厂同时提供。3.5 被检血清:参见附录 B。3.6 补体：参见附录 B。3.7溶血素：由生物药品厂购人，保存于冰箱中备用(由于溶血素加有等量甘油防腐，故使用时应将甘油扣除,即 2 mL 中溶血素的实量为 1 mL)。3.8 红细胞液:参见附录 B。4预备试验4.1补体效价测定将新鲜补体或冻干补体,按表 1比例稀释成一系列不同浓度待用。表 补体稀释法单位为毫升251011 放补体GVB液 一：SN/T 1358.1—2004按表2进行测定选出该批抗原补体效价和使用的管号，继续使用该批抗原补体时可不再测定。表 2 补体测定表单位为毫升雪加101135789261号成分0. 050.050.050.050.050.050. 050.051:1稀释的马血清！0.050.050.050. 050. 050.050. 050. 050. 050.050. 05Cä抗原0. 050.050. 050. 10. 10.10. 10.10. 10.10. 各种稀释度补体置普通冰箱(4℃)过夜(16 h～18 h)0.10.14%致敏红细胞0.10. 0.1置 37℃～38℃水浴箱 30 min,待红细胞沉淀后判定:部溶部溶部溶部溶结果全溶全溶全溶全溶全溶丨全溶」全溶--在补体从表2中可以看出，第一管至第七管皆呈显完全溶血，则该批补体效价为第七管的稀释度。不!用于受检血清时应选择第五管至第十一管，即用C抗原列有三个管完全溶血的七个稀释浓度。但在阳- - .- --性血清对照组中需用第三至第十一管。一4.2溶血素效价测定每批溶血素在使用前需测定效价一次，并标明其效价，继续使用可不再测定。按表3将溶血素稀释;先将溶血素稀释 100 倍,即 0.2 mL溶血素加人 9.8 mLGVB溶液。按表 4测定溶血素效价。单位为毫升表 3 溶血素稀释法溶血索稀释倍数7000800090005 0006 0001 0002 000成分257913469GVB液1100 倍溶血素1111111000倍溶血素1--表 4 溶血素效价测定单位为毫升倍数9 0006 0007 0008 0001 0002 0003 0004 0005 000-.成分··0.050. 050.050.050.050. 050.050.050.05溶血素-0.10. 10.10. 10.10.10. 10.10.11：40倍补体0.10. 10. 10.10. 10.10.1GVB液0.10. 10. 050. 050. 050.050. 050. 050. 050.050. 054%红细胞液置37℃水浴箱10min部分溶部分溶部分溶不溶全溶全溶结果全溶全溶全溶发生全部溶血的最大稀释倍数为该批溶血素的一个单位。表4中从1000倍～5000倍各管都呈现完全溶血，而以5000倍管中所含溶血素量最少，因此，该试验溶血素效价为1：5000倍。在正式试验时,溶血素按两个单位稀释使用。如效价为1：5000倍，则溶血素稀释成2500倍使用。5 正式试验5.1取若干列试管,每列七管，每两列为一组,按表5排列。2 SN/T 135