新冠实验室检测方案.pdfVIP

新冠实验室检测方案 一、新型冠状病毒的实验室检测 新型冠状病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光 RTPCR 鉴定。 任何新型冠状病毒的检测都必须在具备适当条件的实验室由经 过相关技术安全培训的人员进行操作。 本指南中的核酸检测方法主要针对新型冠状病毒基因组中开放 读码框 1ab （open reading frame 1ab，ORF1ab）和核壳蛋白 （nucleocapsid protein，N）。 在实验室要确认一个病例为阳性，满足以下条件： 1）同一份标本中新型冠状病毒2 个靶标（ORF1ab、N）特异性实 时荧光 RTPCR 检测结果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果， 则需要重新采样，重新检测。 2）阴性结果也不能排除新型冠状病毒感染，需要排除可能产生 假阴性的因素，包括： 样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本； 样本收集的过早或过晚； 没有正确的保存、运输和处理样本； 技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR 抑制等。 二、实时荧光 RTPCR 方法检测新型冠状病毒核酸 （1）目的 规范实时荧光 RTPCR 方法检测新型冠状病毒核酸的工作程序，保 证实验结果的正确可靠。 （2）范围 适用于实时荧光 RTPCR 方法检测新型冠状病毒核酸。 （3）职责 检测人员：负责按照本检测细则对被检样本进行检测。 复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行 复核。 部门负责人：负责对科室综合管理和检测报告的审核。 （4）样本接收和准备 核对被检样本姓名、性别、年龄、编号及检测项目等； 待检样本的状态如有异常，需注明； 待检样本应存放于 70 摄氏度冰箱保存。 （5）检测项目 1、新型冠状病毒核酸测定（实时荧光RTPCR 方法）推荐选用针 对新型冠状病毒的 ORF1ab、N 基因区域的引物和探针。 靶标一（ORF1ab）： 正向引物（F）：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA 反向引物（R）：ACGATTGTGCATCAGCTGA 荧光探针（P）：5FAM CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG BHQ13 靶标二（N）： 正向引物（F）：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT 反向引物（R）：CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG 荧光探针（P）：5FAM TTGCTGCTGCTTGACAGATT TAMRA3 核酸提取和实时荧光 RTPCR 反应体系及反应条件参考相关厂家 试剂盒说明。 2、结果判断 阴性：无Ct 值或 Ct 大于等于 40。 阳性：Ct 值小于 37，可报告为阳性。 灰度区：Ct 值在 3740 之间，建议重复实验，若重做结果 Ct 值 小于 40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。 注：如果用的是商品化试剂盒，则以厂家提供的说明书为准。 三、病原生物安全实验活动要求 根据目前掌握的新型冠状病毒的生物学特点、流行病学特征、临 床资料等信息，该病原体暂按照病原微生物危害程度分类中第二类病 原微生物进行管理，具体要求如下： （1）病毒培养 病毒培养是指病毒的分离、培养、滴定、中和试验、活病毒及其 蛋白纯化、病毒冻干以及产生活病毒的重组实验等操作。 上述操作应当在生物安全三级实验室的生物安全柜内进行。 使用病毒培养物提取核酸，裂解剂或灭活剂的加入必须在与病毒 培养等同级别的实验室和防护条件下进行，裂解剂或灭活剂加入后可 比照未经培养的感染性材料的防护等级进行操作。 实验室开展相关活动前，应当报经国家卫生健康委批准，取得开 展相应活动的资质。 （2）动物感染实验 动物感染实验是指以活病毒感染动物、感染动物取样、感染性样 本处理和检测、感染动物特殊检查、感染动物排泄物处理等实验操作， 应当在生物安全三级实验室的生物安全柜内操作。 实验室开展相关活动前，应当报经国家卫生健康委批准，取得开 展相应活动的资质。 （3）未经培养的感染性材料