NY_T 2719-2015苹果苗木脱毒技术规范.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2719-2015苹果苗木脱毒技术规范Technical regulation for eliminating viruses from apple nursery plant2015-05-21发布2015-08-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T2719——2015前言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国果品标准化技术委员会（SAC/TC510）归口。本标准起草单位：中国农业科学院果树研究所、农业部果品及苗木质量监督检验测试中心（兴城）、辽宁省果蚕管理总站。本标准主要起草人：董雅凤、张尊平、胡国君、范旭东、任芳、宣景宏、周俊，- NY/T2719—2015苹果苗木脱毒技术规范1范围本标准规定了苹果苗木脱毒的术语和定义、脱除病毒种类和脱毒方法。本标准适用于苹果栽培品种和砧木品种的脱毒。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。NY/T2281苹果病毒检测技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1苹果试管苗appleplantletinvitro通过组织培养方法获得的无菌瓶装苹果离体植株。3. 2热处理thermotherapy将盆栽苗或试管苗置于光照培养箱或人工气候室内，在较高恒温或变温条件下生长，以抑制病毒在植株体内增殖和扩散，从而获得无病毒新梢或茎尖组织的过程。4脱除病毒种类包括苹果茎沟病毒（Applestemgroovingvirus，ASGV）、苹果茎痘病毒（Applestempittingvirus，ASPV）、苹果褪绿叶斑病毒（Applechlorotic leaf spotvirus，ACLSV）、苹果花叶病毒（Applemosaicvirus，ApMV)和苹果锈果类病毒（Applescarskinviroid，ASSVd)。5脱毒方法5.1器材5.1.1超净工作台：洁净度为100级@≥0.5um；5.1.2高压灭菌锅：最高工作压力为0.142MPa;5.1.3光照培养箱：温度可调范围为0℃～50℃；5.1.4体视显微镜：放大倍数为6.5×～45×；5.1.5pH计：测量精度为士0.05pH；5.1.6电子天平：感量为0.0001g。5.2盆栽苗热处理2月～3月，将前一年移栽或嫁接成活的苹果盆裁苗移人温室，待萌芽后，放人光照培养箱或人工气候室内，进行恒温热处理，（37土2)℃处理30d，或变温热处理，（32士2)℃和（38士2）℃每隔8h变换次，处理60d。每天光照12h以上，光照强度为5000lx～100001x。热处理结束后，立即剪取新梢顶端进行嫩梢嫁接（5.4)或茎尖培养（5.5）。1 NY/T2719—20155.3试管苗热处理试管苗于25℃～28℃继代培养10d～15d，置光照培养箱中（32士2)℃恒温培养5d后，进行恒温热处理或变温热处理（5.2），每天光照12h以上，光照强度15001x～20001x。为防止培养基干燥，热处理前在无菌条件下加入少量灭菌的1/2MS液体培养基。热处理结束后，立即从试管苗上剥取茎尖进行培养（5.5）。5.4嫩梢嫁接5.4.1嫩梢嫁接从热处理结束的盆栽苗上，剪取长约1.0新梢顶端，采用皮下嫁接或劈接方法嫁接到长势良好的无病毒实生砧木或营养系砧木上皮下嫁接：将砧木苗顶部剪平·用刀片在切口，将热处理顶梢削成楔形，插在砧木支自上而下划PUBL韧皮部与木质部之间。ISHING木贝贝枝顶切0.5cm~1.0cm壁接：在砖木主茎或介半大NDAR将顶梢削成楔形，插入卡5.4.2嫁接植株管理R斗薄膜色塑料袋保温保湿，置主意遮阳，加强嫁接后用封口料1iTKP塑科袋顶档od果嫁接6个月以后，肥水管理，促进嫁74SS进行病毒检测。SEARCH5.5茎尖培养LA5.5.1培养基制T会贝附R和生根培MS基本培老5.5.2茎尖分养处理盆栽LCENT苗上上进行消从热处理的醇泽min,无菌毒处理。先用7HO化增殖培养水浸洗3次～5次基上。RY试管苗热m0解部镜下剥取小于基尖，接种在分化从热处理的试管取顶销E增殖培养基上。5.5.3试管苗增殖培养2h的组培室中培养。根将接种的培养瓶置于25°℃、光照0001、每天转接时，先将试管苗基部愈伤切除，再切成带1个～2个胶据生长状况，每1个～2个月转接芽的茎段，接种在增殖培养基上。由同个芽系，统一编号。继代培养5次～6次，同一芽系的试管苗数量达到5瓶以上时，进行病毒检测。5.6病毒检测嫩梢嫁接和茎尖培养获得的所有植株和试管苗均需进行病毒检测，确认是否脱除了本标准规定的所检病毒。检测方法