WS_T 327-2011消毒剂杀灭分枝杆菌实验评价要求.pdf

ICS 11. 080C 59中华人民共和国卫生行业标准WS/T 327--2011消毒剂杀灭分枝杆菌实验评价要求Requirements of mycobactericidal evaluationfor disinfectant in laboratory2011-04-12 发布2011-09-30 实施中华人民共和国卫生部发布 中华人民共和国卫生行业标准消毒剂杀灭分枝杆菌实验评价要求WS/T 327—2011*中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销*开本 880×1230 1/16印张 0.75 字数 16 千字2011年5月第一版　2011年5月第一次印刷*书号：155066·2-21583如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：（010WS/T 327--2011前言根据《中华人民共和国传染病防治法》制定本标准。本标准为推荐性标准。本标准的附录 A和附录 B为规范性附录。本标准由卫生部消毒标准专业委员会提出。本标准由中华人民共和国卫生部批准。本标准负责起草单位：四川大学华西公共卫生学院、中国疾病预防控制中心。本标准主要起草人：张朝武、李新武、王国庆。I WS/T 327-2011消毒剂杀灭分枝杆菌实验评价要求1范围本标准规定了消毒剂杀灭分枝杆菌实验的试剂与仪器、菌悬液和菌片的制备、定量杀灭试验和评价方法。本标准适用于评价各种消毒剂对分枝杆菌的消毒效果。本标准不适用于评价临床使用的治疗性药物对分枝杆菌杀灭效果。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 4789.28食品卫生微生物学检验‧染色法、培养基和试剂GB15981消毒与灭菌效果的评价方法与标准消毒技术规范中华人民共和国卫生部3术语和定义《消毒技术规范》中确立的有关定义和术语适用于本文件。4试剂与仪器4.1试验菌株龟分枝杆菌脓肿亚种CMCC(B)93326（ATCC19977）。4.2 培养基4.2.1分枝杆菌干燥培养基。4.2.2改良罗氏培养基(见附录 A）。4.2.3苏通综合培养基（见附录 A)。4.3其他试剂4.3.1中和剂根据消毒剂种类选择并经中和剂鉴定试验(见附录B)合格者。4.3.2稀释液含 0.1%胰蛋白陈的生理盐水(见附录 A)。4.3.3标准硬水（见附录 A）。4.3.4有机干扰物(见附录 A)。4.4仪器设备4.4.1恒温培养箱。4.4.2恒温水浴箱。 WS/T 327---20114.4.3计时器。4.4.4电动混和器。4.4.5²刻度吸管(0.1 mL、1.0 mL、5.0 mL)或移液器。4.4.6生物安全IⅡ级实验室（BSL-2）。5龟分枝杆菌肿亚种菌悬液和菌片的制备5.1菌悬液的制备5.1.1取冻干菌种管，以无菌操作打开，用毛细吸管吸加适量营养肉汤（应符合GB/T4789.28要求，见附录A)于管中,轻柔吹吸数次,使菌种融化分散。取含5.0mL～10.0 mL营养肉汤或苏通综合液体培养基试管,滴人少许菌种悬液，置 37℃培养 18 h～24 h。用接种环取第1代培养的菌划线接种于商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基平皿上，于37℃培养72h。挑取上述第2代培养物中典型菌落，接种商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基斜面，于37℃培养72h，即为第3代培养物。密封后，在4℃保存，时间不超过6周。5.1.2试验时取第3代斜面培养物，在商品化分枝杆菌专用复合琼脂培养基斜面上连续传代，培养方法与第 3代相同。取第 5代～第6 代的72 h新鲜培养物，用5.0 mL吸管吸取 3.0 mL～5.0 mL稀释液加人斜面试管内，反复吹吸,洗下菌苔。随后,用 5.0 mL吸管将洗液移至一含有 6 g～7 g玻璃珠的无菌圆锥底试管中，用电动混合器混合至少5min。然后将菌液吸人到另一试管内制成菌悬液。菌悬液保存在4℃冰箱内备用。当天使用不得过夜。5.1.3将制成的菌悬液，进行活菌培养计数，按其结果用稀释液稀释至所需浓度（悬液定量杀灭试验时回收菌数为1×10°CFU/mL～5×10° CFU/mL)。5.2染菌载体（菌片）的制备5.2.1载体载体应根据消毒对象选择，常用的有金属、玻璃、滤纸、线、棉布等。根据消毒对象选择适宜材料载体作为代表。载体可以为方形，大小为10 mm×10 mm。当以金属片为载体时，可用12mm直径圆形金属片（厚0.5mm）。所用载体(除滤纸片外)于染菌前,应进行脱脂处理。脱脂方法如下：a）将载体放在含洗涤剂的