NYT 934-2005饲料中地西泮的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65. 120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 934—2005饲料中地西泮的测定高效液相色谱法Determination of diazepam in feedsHigh-performance liquid chromatography2005-09-21发布2005-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 934—2005前 言本标准在参照国内外有关饲料中地西泮的测定方法的基础上，提出用高效液相色谱法（HPLC法）测定饲料中的地西泮。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心（济南）、国家饲料质量监督检验中心（北京）。本标准主要起草人：汤文利、李俊玲、李有志、徐强、李蔚、门晓冬、苏晓鸥。I NY/T934-2005饲料中地西的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中地西洋的方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料。最低检测浓度为1mg/kg2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3原理在碱性条件下，用正已烷与二氯甲烷的混合溶液，将饲料中的地西泮经液液萃取提取出来，再经固相提取、净化，直接在HPLC上分离、测定。4试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.1水符合GB/T6682中一级水和三级水的规定。一般化学分析试验用三级水，高效液相色谱分析和硅酸镁固相萃取小柱的淋洗用一级水。4.2甲醇：色谱纯。4.3碳酸钠溶液:p(Na2CO3）=100 g/L。4.4提取液：正已烷+二氯甲烷=7+3。4.5乙酸铵溶液：c(CHsCOONH4）=25mmol/L，准确称取1.927g乙酸铵，用一级水（4.1)溶解、定容至1000mL，过0.45μm的微孔滤膜。4.6HPLC流动相：乙睛（色谱纯）+乙酸铵溶液（4.5）=45+55，用前超声脱气5min。4.7地西洋标准贮备液（100μg/mL)：准确称取10.1mg地西洋标准品（≥99.0%），用甲醇溶解、定容至100mL。4.8地西洋标准系列溶液：准确移取地西泮标准贮备液（4.7），用甲醇配制成标准系列溶液1.00μg/mL、5.00 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、30.0 μg/mL、40.0 μg/mL、50.0 μg/mL。4.9硅酸镁固相萃取小柱：200mg/3mL。液体的过柱速度为成滴滴下。5仪器5.1实验室用样品粉碎机。，5.2分析天平：感量0.1mg。5.3离心机：4000r/min。5.4超纯水器。5.5超声波清洗器。1 NY/T 934—20055.6旋涡混合器。5.7带盖塑料离心管：100mL5.8高效液相色谱仪：具有C18柱、紫外检测器和二极管阵列检测器。6采样6.1采样步骤：按GB/T14699.1的规定进行。6.2试样的制备：选取具有代表性的实验室样品1000g，用四分法缩减分取200g左右，粉碎过0.45mm孔径的筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1提取称取试料约2g（精确至0.1mg）于离心管（5.7)中，加入三级水（4.1)20mL,用碳酸钠溶液（4.3)调pH 至 8~9。准确加人提取液（4.4)15.00mL；加入提取液后，轻摇数秒；加盖密封，旋涡（5.6)混匀数秒，放气；旋涡混匀30s两次；4000r/min（5.3）离心5min；吸取上清液于具塞试管中。再准确加人提取液15.00mL，重复上述操作，合并两次上清液，旋涡混匀。7.2净化准确移取配合饲料试液（7.1)15.00mL、浓缩饲料试液（7.1)6.00mL、添加剂预混合饲料试液（7.1)3.00mL，注入已用甲醇2mL(4.2)和提取液3mL处理过的硅酸镁固相萃取小柱（4.9），用一级水3mL淋洗，再准确移取甲醇2.00mL洗脱，收集洗脱液。调整洗脱液的用量，使洗脱液中地西泮的浓度在1.00μg/mL～50.0μg/mL之间。旋涡混匀，过0.45μm微孔滤膜，上HPLC测定。7.3HPLC测定参数的设定色谱柱：C8柱，柱长250mm，内径4.0mm，粒度5um或性能类似的分析柱。柱温：室温。流动相：乙+乙酸铵溶液=45+55（4.6)。流速：1.00mL/min。检测器：紫外检测器和二极管阵列检测器。检测波长：254nm进样量：20μL。7.4定性定量方法7.4.1定性方法除用保留时间定性外，还必须