NYT 1103.3-2006转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素 第3部分：硫代葡萄糖苷的测定.pdf

ICS 65.020.99B 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1103. 3--2006转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素第3部分：硫代葡萄糖苷的测定Safety assessment of genetically modified plant and derived productsPart 3: assay of anti-nutrients glycosinolate2006～10-01实施2006-07-10 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 1103.3—2006前言本标准附录 A为资料性附录,附录B为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、农业部科技发展中心、中国农业大学、天津市卫生防病中心。本标准主要起草人：李培武、杨月欣、丁小霞、韩军花、张文、李宁、汪其怀、黄昆仑、刘克明、刘培磊、连庆。I NY/T 1103.3--2006转基因植物及其产品食用安全检测抗营养素第3部分：硫代葡萄糖苷的测定1 范围本标准规定了转基因油菜籽及其产品中硫代葡萄糖苷的高效液相色谱测定方法。本标准适用于转基因油菜籽及其产品中硫代葡萄糖苷的高效液相色谱测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标推，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB 5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T14488.1油料种籽含油量测定法GB/T14489.1油料水分及挥发物含量测定法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1转基因油菜籽 genetically modified rapeseed指利用基因工程技术改变基因组构成,用于农业生产或者农产品加工的油菜籽。3.2转基因油菜籽产品 products derived from genetically modified rapeseed指转基因油菜籽的直接加工产品和含有转基因油菜籽的产品。3.3相对校正系数response factors待测硫代葡萄糖苷的摩尔吸光系数与内标的摩尔吸光系数的相对比值。4　原理用70%甲醇水溶液提取硫代葡萄糖苷，然后在阴离子交换树脂上纯化,并酶解脱去硫酸根，反相色谱柱分离，紫外检测器检测硫代葡萄糖苷。5试验材料转基因油菜籽及其产品、受体油菜籽及其产品。如果对转基因油菜籽产品中的硫代葡萄糖苷进行测定,转基因油菜籽产品和受体油菜籽产品的处理条件应相同。上述材料的水分含量和种植环境应基本一致。6 试剂除非另有说明，仪使用分析纯试剂；水为蒸馏水。6.1硫酸酯酶溶液:Helix pomatia H1 型(EC ),每毫升硫酸酯酶溶液的活性单位不低于0.5,1 NY/T 1103.3—2006硫酸酯酶溶液应即配即用。6.2葡聚糖凝胶悬浮液:称取 10 g DEAE Sephadex A 25 葡聚糖凝胶,浸泡在过量的 2 mol /L 醋酸溶液中,静置沉淀,再加人2mol/L醋酸溶液,直到液体体积是沉淀体积的2倍，于 4℃冰箱中存放,待用。6.370%甲醇溶液:取 70mL甲醇,加水定容至 100mLc6.40.02mol/L醋酸钠溶液:称取0.272g醋酸钠(CHsCOONa?3H²O),加人800mL水溶解,用醋酸调节溶液的pH至4.0,加水定容至 1L。6.56mol/L甲酸咪唑溶液：称取204g咪唑,溶解于113mL甲酸中,待溶液冷却后加水定容至 500mLo6.6内标：用丙烯基硫代葡萄糖苷(Mr=415.49)作内标,当样品中含有丙烯基硫代葡萄糖苷时,用苯甲基硫代葡萄糖苷(Mr=447.52)作内标。对硫代葡萄糖苷含量低于20.0 umol/g的样品,可将下述6.6.1至6.6.4中的内标溶液浓度降为1mmol/L至3mmol/L。内标溶液在4℃的冰箱中可存放3周，在－18℃条件下可保存更长时间,内标溶液的纯度检定参见附录A。6.6.15mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷溶液：称取207.7mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80mlL水中，加水定容至 100 mL6.6.220mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷溶液：称取831.0mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容至100mL。6.6.35mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷溶液:称取223.7mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容至100mLc6.6.420 mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷溶液:称取 895.0mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于 80 mL水中,加水定容