SNT 2497.28-2010进出口危险化学品安全试验方法 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.28—2010进出口危险化学品安全试验方法第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用Test method of import and export dangerous chemicals-Part 28 : Shuttle vector function in detection of mutagenesis2010-03-02 发布2010-09-16实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2497.28—2010前言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验;第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型遥繁殖试验；第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：睾丸细胞UDS试验；第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：胭窝淋巴结试验；第9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；一第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；第16部分：Western-Blot实验；一第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；一第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：Northern Blot 实验;1一第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量（BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第28部分。本部分修改采用《分子克隆》中的相关的检测方法，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按GB/T1.1做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。本部分主要起草人：冯智勐、王利兵、王华、张园、向雪洁、赵好力宝。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准T SN/T 2497.28--2010进出口危险化学品安全试验方法第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用1 范围SN/T 2497 的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中穿梭质粒在突变检验中的应用技术的术语和定义、试验原理、试验方法和试验结果，本部分适用于进出口危险化学品安全试验中的致突变性检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。《分子克隆》3术语和定义下列术语和定义适用于本部分。3.1穿梭质粒shuttle vector穿梭质粒是既能依靠质粒基因组在原核细胞中繁殖,又能依靠病毒基因组在真核细胞中复制的类质粒。3.2靶基因target gener是诱变剂在哺乳动物细胞中作用的靶子,有时叔是赋予细胞某种生物特征的选择基因3.3转化 transformation将 DNA导人大肠杆菌或酵母细胞,并稳定地整合于基因组中，从而使受体细胞发生永生化改变的现象。3.4转染 transfection病毒 DNA或RNA导人感受态大肠杆菌的过程。也指将任何 DNA(包括质粒DNA)或 RNA导入受体细胞的过程。4试验原理穿梭质粒除了含有在真核和原核细胞中复制的起点外,穿梭质粒带有对突变敏感的靶基因,将诱变剂处理的质粒转染哺乳动物细胞或先转染细胞后经诱变剂处理，在细胞内修复和复制后，回收质粒转化宿主菌,在一定条件下筛选突变子,并进一步对突变子靶基因测序以分析突变的位点、类型、序列特异性等信息，从而研究诱变剂的诱变机制。由于诱变是在哺乳动物细胞内发生的，因而能够较真实地反映高等动物的诱变机制；且诱变的发生通过宿主菌显色反应来显示，其任一位置发生的单碱基置换都能从表 SN/T 2497.28—2010型改变表现出来；进一步对突变子靶基因进行序列分析，使表型的改变在DNA分子水平上得到证明，敏感性极高。5试验方法5.1试剂耗材细胞、质粒及其宿主细菌可根据试验目的进行选择。一选择剂可根据试验目的和质粒上的选择基因进行选择，如Amp、G418等。显色剂,需要根据试验目的选择。常用的有：X-