NY_T 3427-2019棉花品种枯萎病抗性鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020.01B 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T花品种枯萎病抗性鉴定技术规程Technical code of practice for identification of cotton variety resistanceto Fusarium wilt2019-01-17 发布2019-09-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3427—2019前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业农村部种业管理司提出并归口。本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、中国农业科学院棉花研究所本标准主要起草人：张毅、朱荷琴、冯自力、张芳、冯鸿杰、魏锋、赵丽红、师勇强。一 NY/T 3427—2019棉花品种枯萎病抗性鉴定技术规程1范围本标准规定了棉花品种对枯萎病L病原菌：尖孢镰刀菌萎专化型FusariumorysporumSchlectend：Fr.F.sp.vasinfectum(Atk.）W.C.Snyd.H.N.Hans.抗性的人工接菌鉴定技术方法和程序。本标准适用于棉花品种区域试验枯萎病抗性室内鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4407.1经济作物种子第1部分：纤维类GB/T22101.4棉花抗病虫性评价技术规范第4部分：枯萎病3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1病株率disease incidence衡量发病植株多少的指标。用发病植株数占全部调查植株数的百分率表示，记作Di。本标准中病株率仅作为辅助指标。3.2病情指数disease index衡量发病株率和严重度的综合指标。用发病植株的总病级数与全部调查植株的理论最高总病级数的比较相对数表示，记作DI。3.3病情指数校正系数correction coefficient of disease index修正病情指数使其标准化的系数，用标准病情指数（50.0）与当次鉴定感病对照品种病情指数的比值表示，记作K。3.4相对病情指数relativediseaseindex为消除地区间、年度间、批次间鉴定结果的差异，使鉴定结果间具有可比性而对病情指数进行标准化的指标，用供试棉花品种的病情指数与病情指数校正系数的乘积表示，记作RDI。4鉴定条件要求4.1病原菌培养所需仪器设备恒温摇床、恒温培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、培养皿、试管、剪刀、镊子、广口瓶、酒精灯等。4.2鉴定温室所需条件鉴定温室应具备控制温度在20℃～28℃，能够随时通风，不同部位光照一致。5鉴定前准备5.1病原菌选择与培养5.1.1病原菌选择1 NY/用棉花枯菱病菌7号小种；如当地的枯萎病菌小种相对于7号小种为优势小种，则选择当地优势小种作为鉴定用病原菌。5.1.2病原菌培养在超净工作台上，将保存的棉花枯萎病菌试管斜面菌种，转接到马铃薯琼脂培养基（PDA)平板上，置25℃下培养6d。挑取菌落边缘2mm的新鲜菌块，接种到查比克（Czapek）液体培养基中，置25℃下，150r/min，黑暗培养6d备用。吸取15mL上述菌液转接至装有玉米沙粒培养基的聚丙烯菌种袋中，混匀后置25℃培养箱中静置培养7d，待枯萎病菌的菌丝布满后，取出培养物，自然风干备用。培养基配制见附录A。5.2带菌土准备及纸钵制作将沙壤土过筛（孔径5mm)后，和泥炭土、沙子分别经0.1MPa、121℃、湿热灭菌30min，按3：1：1混匀称重，加人总干重0.8%的枯萎病菌玉米沙粒培养物，混合均匀。用十净的纸做直径6cm、高10cm的纸钵，均匀排列在塑料盘（30cm×20cm×9cm）中，每盘3排4列，将已混均匀的带菌土装人纸钵中，至3/4高度，待用。5.3对照品种选择选用感病对照和抗病对照各1个。感病对照要求高度感枯萎病的常规棉花品种或材料，选择标准为规定接种量及适宜环境条件下病情指数能达到50.0左右，且感病性稳定；抗病对照选用抗枯萎病常规品种，规定接种量及适宜环境条件下病情指数在10.0以下，且抗病性稳定。为减缓抗、感对照的抗性变异，可将对照品种在无病地隔离繁殖，冷库保存，一次繁殖，供5年以上使用。6鉴定程序6.1试验材料处理鉴定的棉花材料应为硫酸脱绒未包衣的种子，符合GB4407.1的要求。6.2试验材料种植播种前，依次从纸钵空隙间均匀浇水，每盘300mL；随后将鉴定品种的种子摆放于纸钵中，每钵8粒～10粒。每品种3次重复，每重复1盘12钵；然后用灭菌沙子覆盖至与钵体平齐6.3温室管理播种后，温度控制在23℃～28℃；出苗后，及时疏苗，每钵留苗3棵～5棵；土壤湿度控制在60%～80% 。6.4病情