NY 402-2000脱毒甘薯种薯（苗）病毒检测技术规程.pdf

B 15中华人民共和国农业行业标准NY/T 402-2000脱毒甘薯种薯（苗)病毒检测技术规程Rules for virus detection of virus-freeseed (seedling) sweet potatoes2000-09-22 发布2000-12-01实施中华人民共和国农业部‧发 布 NY/T 402-2000前言为了有效地实施对脱毒甘薯种薯(苗)质量检验和管理,规范脱毒甘薯种薯(苗)市场，促进甘薯脱毒技术推广，实现脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测的规范化、标准化，特制定本规程。本规程在参照国内外甘薯病毒检测技术最新研究进展的基础上，结合当前国内生产实际，力求达到快速、准确、可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生分布范围广、危害性大的病毒。检测方法主要采用指示植物检测和斑点酶联免疫吸附检测方法。本规程内容包括脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测的适用范围、检测对象、抽样方法、检测方法和质量要求。本标准的附录 A、附录 B都是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准主要起草单位：农业部植物脱毒种苗质量监督检验测试中心(济南)、山东省植物保护总站。本标准主要起草人：孙作文、商明清、李明立、刘敬东、杨勤民、任宝珍。 中华人民共和国农业行业标准脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程NY/T 402—2000Rules for virus detection of virus-freeseed (seedling) sweet potatoes1 范围本标准规定了脱毒甘薯种薯(苗)的病毒检测方法和操作规程。本标准适用于脱毒甘薯种薯(苗)的病毒检测。2 定义本标准采用下列定义。2.1 脱毒苗应用茎尖组织培养技术获得的再生试管苗,经检测确认不带甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)和甘薯潜隐病毒(SPLV),才确认是脱毒苗。2.2脱毒种薯(苗)从繁殖脱毒苗开始，经逐代繁殖增加种薯(苗)数量的种薯(苗)生产体系生产出来的。分原原种、原种、生产用种三个级别。2.2.1 原原种 pre-elite用脱毒苗在防虫网室、温室条件下生产的符合质量标准的种薯(苗)。2.2.2 原种 elite用原原种作种薯,在良好隔离条件下生产出的符合质量标的种薯(苗)。2.2.3 生产用种 certified seed or seedling用原种作种薯，在隔离条件下生产出的符合质量标准的种薯(苗)。2.3 病毒病株允许率指各级甘薯种薯(苗)繁殖田中病毒病株的允许比率。3 检测对象甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV);甘薯潜隐病毒(Sweet potato latent virus,SPLV)。4 抽样4.1组培苗抽样4.1.1脱毒核心材料：每株必须检测。4.1.2 扩繁苗：随机抽取1%～2%的扩繁苗检测。4.2田间抽样4.2.1原原种和原种抽样：定植后30天、60天、收获前2周，在目测全田的基础上，采用五点取样法，中华人民共和国农业部2000-09-22批准2000-12-01实施A NY /T 402--2000抽样数量为0.1hm²以下200株;0.11～1hm*500株；超出1hm²面积,划出另一检验区,按本规程规定的面积取样。每株取上、中、下部叶片1～5g，低温保湿存放,24 h 内检测。4.2.2生产用种抽样：定植后30天、收获前两周,在目测的基础上，采用随机取样法,0.1 hm²以下检验2点，每点100株，0.11～1hm²检验五点，每点100株；1.1～5hm²检验10点，每点100株超出5hm面积，划出另一检验区，按本规程规定的面积取样。取样方法及样品保存同4.2.1。4.3商品种薯(苗)抽样没有经过田间检验的种薯(苗)必须进行块根或种苗检验。4.3.1根据甘薯种薯(苗)不同存放方式，采用分层设点取样或随机取样，抽样数量见表1。表1 抽样数量标准表抽样最低数量抽样百分率，%种薯(苗)总量种类100株6~10≤10 000 株薯苗3~510 000 株100 kg6~10≤10 000 kg种薯3~510 000 kg注：不足抽样最低数量的全部作为混合样品。4.3.2将第一次抽取的样品混合后，进行二次抽样，随机抽取10%的混合样品检测。5检测方法5.1斑点酶联免疫吸附(Dot-ELISA)检测法用于检测甘薯羽状斑驳病毒和甘薯潜隐病毒,检测方法见附录 A。5.2指示植物捡测法用于辅助检测甘薯羽状斑驳病毒和甘薯潜隐病毒,检测方法见附录B。检测甘薯病毒的指示植物及症状见表2。表 2检测甘薯病毒的指示植物及症状状症指示植物病毒种类羽状斑驳巴西牵牛SPFMV叶脉变黄巴西牵牛SPLV6质量要求凡斑点酶联免疫吸附检测或指示植物检测呈阳性者为带毒薯(苗）。原原种:病毒病株允许率是 0。