SN_T 4705-2016化学品 蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4705--2016化学品蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验Chemicals---Honey bee larval toxicity test,single exposure2016-12-12 发布2017-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4705—2016創言前 本标准按照GB/T1.1-—2009的规则起草。本标准与联合国经济合作与发展组织（OECD)化学品测试方法NO.237（2013）《密蜂幼虫单次暴露毒性试验》（英文版）有关技术内容致，是OECD成年蜜蜂测试导则213和214的补充，可视为化学品蜜蜂整体风险评估方案中的一种低层次试验。本标准做了下列结构和编辑性修改：删除了引言；增加了“范围”一章；一将各章节重新编号；删除了参考文献部分。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口本标准起草单位：中华人民共和国宁波出人境检验检疫局。本标准主要起草人：刘汉伟、陈丹超、谭曜、孙运、李冰、陈威威、李锦花。 SN/T 4705—2016化学品蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验1范围本标准规定了化学品蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验的方法。本标准适用于测试化学品（尤其是具有杀虫活性的成分或制剂)对蜜蜂幼虫的单次暴露毒性。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1剂量dose受试物的使用量（ug），用单只蜜蜂幼虫所用受试物的质量（ug/只幼虫）来表达。2.2半数致死量LD50染毒后导致50%实验生物死亡的受试物统计学数量。本试验半数致死量以单个蜜蜂幼虫所用受试物的质量（ug/只幼虫）来表达。2.3 mortality死亡率死亡的受试生物占总受试生物的比率。3试验准备3.11供试生物3.1.1供试生物来源来源于三个蜂群的蜜蜂幼虫（Apis mellifera），每一个蜂群的幼虫作为个重复组。蜂群需有充足的饲料供应，健康且尽可能没有感染疾病和寄生虫，有详细的来源及生理状况记录。3.1.2供试生物卫生处理如对蜂群进行了螨虫或疾病等卫生处理，则应在报告中注明处理日期和所用产品相关信息。试验开始前四周内不得进行卫生处理。3.1.3供试生物获取试验前第3天(D-3)用隔离笼(内含一个空蜂窝或一个有正在孵化的工蜂和空巢室的蜂窝)将至少三个蜂群的蜂王分别隔离在各自的蜂群内（图1），隔离笼紧靠装有蜂卵的蜂巢。蜂王在试验前第2天(D-2)产新卵之后放出，蜂王关在隔离笼内时间不得超过30 h，应减少隔离时间以保障幼虫间的体型和年龄差异最小化。装有蜂卵的蜂巢在试验第1天(D-1)前均应放置在隔离笼内。1 SN/T 4705—2016含幼虫的蜂房隔离笼子脾图1内置一个隔离笼的蜂箱横截面3.2试验设备3.2.1聚苯乙烯等化学惰性材料制成的小仓室（内径为9 mm，深度为 8 mm，如图 2）,鼓风于燥箱，多孔板（48孔），密闭透明塑料容器，恒温培养箱。3.2.2小仓室使用前应消毒处理，可先将小仓室浸没于乙醇或其他消毒溶液中30 min，然后在鼓风干箱中干燥。干燥后的小仓室放人48孔板中，顶端应与48孔板保持在同一个水平，可在48孔板底部放置一个用500uL消毒溶液及15%（质量浓度)甘油润湿的牙科棉卷（图2)来保持高度。幼虫十食物转移仓孔经500μL消毒液及15%（质量浓度）甘油润湿的牙科棉卷图2置于培养孔内的幼虫小仓室3.2.3试验时将48孔板放置在密闭透明塑料容器中，容器内放置个装有硫酸钾（K2SO4）饱和溶液的培养皿使空气湿度达到饱和。3.3饲料3.3.1根据幼虫不同发育阶段的需求，饲料分为三种：a）饲料A(第1天）：50%新鲜蜂王浆＋50%水溶液（内含2%酵母提取物、12%葡萄糖和12%果糖)。b）饲料B（第3天）：50%新鲜蜂王浆+50%水溶液（内含3%酵母提取物、15%葡萄糖和15%果糖)。2 SN/T 4705--2016c）饲料C(第4天到第6天）：50%新鲜蜂王浆+50%水溶液（内含4%酵母提取物、18%葡萄糖和18%果糖）。3.3.2糖溶液中各组分完全溶解后，再与蜂王浆混合。“新鲜蜂王浆”是指12个月内采集的蜂王浆；在放入冷冻箱（≤一10℃)保存前，可先分成5g一份，以避免每次试验前都需解冻整批蜂王浆。商业来源的蜂王浆，若使用效果符合要求（如幼虫期的死亡率不超过15%），则亦可以使用。推荐对每批蜂王浆进行分析，以证实其不含污染物（主要是抗生素和杀虫剂）。3.3.3试验期间的饲料应存放于0℃～5℃的冰箱内（但不冷冻）。也可提前准备好并深度冷冻，使用前解冻。3.4受试物溶液配制3.4.1通常使用去离子水作为溶剂配制受试物储备溶液，当受试物溶解性较差时，可使用有机溶剂（如丙酮)来配制。应尽可能减少有机溶剂使用量，若使用丙酮，则不得超过染毒当天（试验第4天)最终饲料体积的5%。3.4