SN 1604-2005进出口动物源食品中氯霉素残留量的检验方法 酶联免疫法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1604—2005进出口动物源性食品中氯霉素残留量的检验方法酶联免疫法Inspection of chloramphenicol residues in animalderived food for import and export--Enzyme linked immunosorbent assay method2005-08-18 发布2006-02-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1604—2005前言本标准的测定方法参照了德国 r-biopharm公司生产的氯霉素酶联免疫定量测定试剂盒的说明书。本标准的抽样和制样方法参照了欧盟98/179/EC指令，FAO/WHO农药残留法典委员会和德国商品检验机构所推荐的方法。本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：关嵘。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1604—2005进出口动物源性食品中氟霉素残留量的检验方法酶联免疫法1 范围本标准规定了进出口动物源性食品中氯霉素残留量的抽样、制样和酶联免疫测定方法。本标准适用于进出口鸡肉、猪肉、虾仁和肠衣中氯霉紊残留量的筛选检验，阳性结果须用其他方法进行确证。2抽样和制样2. 1养殖场抽样将虾洗净，沿脊背剖开取肌肉组织 10 g～50 g，总量 500g。2.2屠宰加工厂抽样在屠宰线上，用清洁的锋利刀割取肌肉组织300 g～500 g。2.3肠衣集装箱抽样从一个集装箱第101桶至第250桶中随机抽取8桶，每桶抽取1副共计8副，约128个肠衣端头混合成一个样品进行检验。2.4仓库抽样2.4.1检验批以不超过2500件为一检验批，同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2. 4.2抽样数量抽样数量见表1。表1抽样数量批量/件最低抽样数/件1~25126~1005101~ 25010 251~50015 501~1 000171 001~2 500202.4.3抽样方法按表1规定的抽样件数随机抽取，每件抽取一包，用清洁的锋利刀割取样品，每包不少于50g，总量不少于 1 kg。2.5缩分小样肉类样品去除脂肪组织后用均质器均质；虾仁样品直接均质；肠衣样品用清洁的剪刀剪成长度不超过5mm的片段，当肠衣盐分较多时，先用重蒸馏水漂洗 20 min 以去除盐分，沥干后再剪碎。每一样品都应分成至少两个相同的小样，每个小样的数量应能满足每次进行完整分析的用量。1 SN/T 1604—20052.6样品容器样品应装于合适的清洁干燥容器中，以保持样品的完整性和可追溯性。可采用聚乙烯塑料容器，玻璃容器等惰性材料容器（不允许使用橡胶容器)盛装样品，然后再放入较大的干净容器中密封装运。2.7样品封识应在每个样品容器的外表贴上标签，标签上注明样品名、样品编号、生产批号、抽样日期、抽样地点、堆位、抽样人员，并由抽样人员或官方人员加封。2.8样品保存抽样后样品应立即在一18℃以下冷冻保存,0℃～5℃条件下48h内送达实验室。在抽样和制样过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3测定方法3.1测定原理本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应。氯霉素与氯霉素酶标记物竞争数量有限的氯素抗体，用酶标仪测量微孔溶液的吸光度值，氯霉素浓度与吸光度值成反比，按绘制的校正曲线定量计算。3. 2 试剂和材料除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。3.2.1乙酸乙酯。3.2.2乙腈。3.2.3正已烷。3.2. 4氯化钠溶液:0.5 mol/L,经 121℃ 15 min 高压灭菌。3.2.5半对数坐标纸。3.2.6氯霉素酶联免疫定量测定试剂盒。注：本标准 3.5酶联免疫测定步骤中使用的试剂盒为德国 r-biopharm 公司产品,其他公司等效试剂盒的操作步骤可能略有不同,须经试验评估验证后使用。3.3仪器和设备3.3.1酶标仪。3.3.2均质器。离心机。.4氮气挥发器。振荡器。3.3.5#3.3.6微量加样器：50μL。微量多通道加样器：50μL、100μL。试样提取和净化称取5.00g试样至离心管中，加人15ml.乙腈-水溶液（84+16）,振荡1min，15℃ 3000r/min离心20 min。移取3mL上清液至玻璃试管中，加人3mL乙酸乙酯和 1 mL氯化钠溶液，振荡 1 min，静置分层后去掉下层的水相，有机相用氮气在60℃水浴中吹干，残留物用1mL试剂盒提供的缓冲液溶解，加人1mL正已烷振荡1min，1500r/min离心10min，去掉上层的正已烷和脂肪层后供测定用。3.5 酶联免疫测定将一定数量的微孔条插入框架（标准液和样液分别做