SN_T 3589.2-2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法 第2部分：安康鱼成分检测 实时荧光PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3589.2—2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第2部分：安康鱼成分检测实时荧光 PCR 法Identification of fish species in export food-Part 2: Detection of monk fish ingredient-Real-time PCR method2013-11-06 发布2014-06-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3589.2—2013前言SN/T3589《出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法》共分为7部分：第1部分：石斑鱼成分检测实时荧光PCR法；第2部分：安康鱼成分检测实时荧光PCR法；第3部分：鲑鱼成分检测实时荧光PCR法；-第4部分：河豚鱼成分检测　实时荧光PCR法；-第5部分：黄鱼成分检测实时荧光PCR法；第6部分：金枪鱼成分检测　实时荧光PCR法；-第7部分：鳕鱼成分检测实时荧光PCR法。本部分为SN/T3589的第2部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、宝生物工程（大连）有限公司。本部分主要起草人：曹际娟、李晶泉、郑秋月、张浩、徐君怡、封雪、徐杨、吴亚君。I SN/T 3589.2--2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第2部分：安康鱼成分检测实时荧光 PCR 法1范围SN/T3589的本部分规定了出口食品中安康鱼成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品中的中国黄安康鱼（Lophius litulon）和美洲安康鱼（Lophius americanus）等安康鱼及其制品鉴伪的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1安康鱼Lophiformes安康鱼属于辐鳍鱼纲，安康目，安康科体柔软，无鳞，头和体的边缘有许多皮质突起。安康鱼分布于印度洋及北太平洋西部，我国产午东海北部以及黄海和渤海3.2实时荧光 PCR real-time PCR在 PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3.3Ct 值I cycle threshold value每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithyl ammonium bromide)Tris:三（羟甲基)氨基甲烷［tris（hydroxymethyl）aminomethane] SN/T 3589.2-2013EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)E Taq HS:高效热启动 DNA 聚合酶OD:光密度值(optical density)5方法提要提取样品DNA，以DNA为模板，分别采用安康鱼成分的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在安康鱼成分。6仪器和设备6.1实时荧光PCR仪。6.2离心机：离心转速≥12000r/min。6.3微量移液器:10 μL、100 μL、200 μL、1 000 μL。6.4 冰箱:2℃~8℃,-20℃。6.5高压灭菌锅。6.6核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。6.7 pH计。6.8天平:感量 10 mg。6.9恒温水浴锅。7·试剂和材料除另有规定外，所有化学试剂为分析纯。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。7.1检测用引物(对)序列和探针：安康鱼成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分）引物和探针详见表1。表1试验用引物和探针目的基因名 称序列(5′-3)内参照5′端引物TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAAATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAA内参照探针CC-Eclipse中国黄安康鱼5端引物GGGCAATCAACTTTATTAC1中国黄安康鱼细胞色素TTCGGTCTGTTAAGAGTA中国黄安康