SN_T 3064.5-2011国境口岸蝇类、蜚蠊携带重要病原体检测方法 第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3064.5—2011国境口岸蝇类、携带重要病原体检测方法第5部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌Detections of important pathogens in flies and cockroachs at frontier port-Part 5:Proteus vulgaris and Proteus mirabilis2012-04-01实施2011-09-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防件 SN/T 3064.5—2011前言SN/T3064《国境口岸蝇类、董携带重要病原体检测方法》分为11部分：第1部分：通用要求；-第2部分：沙门氏菌;第3部分：志贺氏菌；第4部分：致泻性大肠杆菌；-第5 部分:普通变形杆菌和奇异变形杆菌;第6部分：霍乱弧菌；第 7部分：副溶血性弧菌；第8部分：金黄色葡萄球菌；第9部分：蜡样芽孢杆菌；-第10部分：甲型肝炎病毒；第11部分：寄生虫卵（包囊)。本部分为 SN/T 3064 的第5部分。本部分按照GB/T1.1---2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本部分主要起草人：张海滨、刘培、关淳、高旗利、张霞、何晨光。1 SN/T 3064.5—2011国境口岸蝇类、蛋携带重要病原体检测方法第5部分：普通变形杆菌和奇昇变形杆菌1范围SN/T3064的本部分规定了国境口岸输人性蝇类和携带普通变形杆菌和奇异变形杆菌的检测方法、结果判断、结果报告及阳性结果处置。本部分适用于检验检疫机构对输入性蝇类和董携带普通变形杆菌和奇异变形杆菌的检测和报告。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3样本检测3.1培养基和试剂需要的培养基和试剂为GN增菌液，伊红美蓝琼脂（EMB)，营养琼脂（NA）,SS琼脂，尿素琼脂，蛋白陈水，克氏双糖培养基，苯丙氨酸培养基，鸟氨酸脱羧酶试验培养基，明胶培养基，糖发酵管。具体成分及制备方法见GB/T4789.28。除另有规定外，所用试剂为分析纯或生化纯，水为蒸馏水。3.2检测程序变形杆菌和奇异变形杆菌检测程序参见附录A。3.3操作步骤3.3.1增菌与分离分别取1mL样本处理液加人到100mLGN肉汤中,将GN肉汤放温箱中，置于36℃士1℃,培养18 h～24 h。摇匀 GN 增菌液,取一环 GN 增菌液，四区法划线分别接种于 SS琼脂和 EMB琼脂平板，置36℃土1℃培养18h～24h。观察是否有可疑菌落生长，如有可疑菌落，从平板上至少挑取2个可疑菌落进行鉴定。普通变形杆菌和奇异变形杆菌在SS琼脂上的典型菌落特征为：1mm～2mm大小，无色半透明或有黑色中心，边缘整齐，表面光滑的圆形菌落。在EMB上呈透明或半透明、光滑、波纹状蔓延生长菌落。3.3.2纯培养从SS琼脂和EMB琼脂平板上各挑取可疑菌落，划线接种NA平板培养基，置36℃士1℃，培养过夜，进行以下试验。1 SN/T 3064.5-—20113.3.3革兰氏染色变形杆菌为革兰氏染色阴性杆菌，不形成芽孢。3.3.4　初步生化鉴定分别接种纯培物于克氏双糖琼脂、尿素琼脂、苯丙氨酸琼脂各一管。于36℃±1℃，培养18h～24 h，分别观察结果。普通变形杆菌和奇异变形杆菌应同时满足以下条件：a）硫化氢阳性；b）尿素酶阳性;c）苯丙氨酸脱氨酶阳性。3.3.5生化鉴定同时满足以上要求的纯培物要按照表1做进·步生化鉴定，也可采用API20E或VITEK进行鉴定。表1普通变形杆菌和奇异变形杆菌生化性状生化项目普通变形杯菌奇异变形杆菌靛基质1鸟氨酸脱羧酶+麦芽糖发酵木糖发酵+鼠李糖发酵甘露醇发醇明胶液化+M结果判定在分离培养基上无特征菌落或有特征菌落，菌体形态或生化性状不符，则判定为普通变形杆菌和奇异变形杆菌阴性。若分离培养基上有特征菌落且菌体形态和生化性状相符，则判定为普通变形杆菌和(或)奇异变形杆菌阳性。5结果报告结果判定为阴性，报告该批样本中未检出普通变形杆菌和奇异变形杆菌；结果判定为阳性，报告该批样本中检出普通变形杆菌和（或)奇异变形杆菌。6阳性结果处置判断为阳性结果的分离株应由有资质的相关实验室确认，阳性结果确认后应及时上报主管部门。2 SN/T 3064.5--2011附录A（资料性附录）检测程序图样本15只～20只蝇或小嬷或3只～5只大为一组，用0.5%吐温-80的生理盐水处理1 mL+GN100 mL36 ℃±1 ℃18 h~24 hSS和EMB36 ±1 ℃| 18 h~24